[發明專利]一種含氰基擬除蟲菊酯農藥多殘留分析的酶聯免疫吸附檢測方法

無效

• 申請號: 200810021222.6
• 申請日: 2008-07-22
• 公開（公告）號: CN101334408A
• 公開（公告）日: 2008-12-31
• 發明（設計）人: 胥傳來;殷祥剛;郝曉蕾;李雅麗;袁媛
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/78
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種含氰基擬除蟲菊酯農藥多殘留分析的酶聯免疫吸附檢測方法，其特征在于：

(1)抗原的包被

用半抗原間苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯與卵清蛋白OVA的偶聯復合物作為包被抗原，以0.05M、pH?9.6的碳酸鈉緩沖液稀釋包被抗原1∶100～1∶200，濃度為4～8μg/mL作為包被液，在酶標板的每孔中加入100μL包被液，4℃孵育過夜，用含2％OVA的上述碳酸鈉緩沖液作為封閉液封閉；

(2)競爭反應

將免疫制備的間苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯多克隆抗體用抗體稀釋液：含1％明膠、含0.5％吐溫-20、pH＝7.4的磷酸鹽緩沖溶液PBST，按1∶100～1∶200比例稀釋后，加入酶標板中，每孔加50μL；同時每孔分別加入用標準品稀釋液稀釋的0ng/mL，0.1ng/mL，1.0ng/mL，10ng/mL，100ng/mL，1000ng/mL，10000ng/mL，100000ng/mL一系列濃度之一的含氰基擬除蟲菊酯農藥標準品，每孔加50μL，37℃孵育1h后以PBST洗滌液洗滌3～5次；

(3)加酶標二抗

加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔GAR-HRP，以抗體稀釋液稀釋為1∶5000，每孔加100μL，37℃溫育1h后以PBST洗滌液洗滌3～5次；

(4)顯色

每孔加入100μL顯色液，暗處37℃反應15min，取出后每孔加入100μL、2mol/L的硫酸終止液，用酶標儀測定吸光值A₄₅₀，與所作的標準曲線對比算出待測樣品的含氰基擬除蟲菊酯濃度。

2.根據權利要求1所述的酶聯免疫吸附檢測方法，其特征是標準品稀釋液的配方為在體積含量30％甲醇的pH＝6.5的PBS中加入質量比為5％的氯化鈉。

3.根據權利要求1所述的酶聯免疫吸附檢測方法，其特征是PBST洗滌液的配方為1000mL蒸餾水中加入氯化鈉4～6g、磷酸二氫鉀0.1～0.3g、磷酸氫二鈉2～4g、氯化鉀3～6g、吐溫-200.5～3mL。

4.根據權利要求1所述的酶聯免疫吸附檢測方法，其特征是顯色液包括A液和B液，A液配方為每100mL水中加入0.933g檸檬酸，3.68gNa₂HPO₄·12H₂O，18μL30％H₂O₂；B液配方為60mg四甲基聯苯胺溶于100mL乙二醇；使用時按A∶B＝1∶1的比例使用。