[發明專利]一種枯草芽孢桿菌生產γ－谷氨酰轉肽酶的方法

有效

• 申請號: 200810021188.2
• 申請日: 2008-08-19
• 公開（公告）號: CN101363014A
• 公開（公告）日: 2009-02-11
• 發明（設計）人: 江波;張濤;帥玉英
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種枯草芽孢桿菌生產γ-谷氨酰轉肽酶的方法，其特征在于：

(1)對γ-谷氨酰轉肽酶產生菌枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)CCTCC?NO：M?208083進行斜面、種子、發酵三級培養；

斜面培養：培養基組分以g/L計：蛋白胨8～10，牛肉膏3～5，氯化鈉3～5，瓊脂20，pH?7.0～7.2，121℃滅菌20min，培養條件為：培養溫度35～40℃，培養時間8～16小時；

種子培養：培養基組分以g/L計：葡萄糖15～20，酵母膏10～15，玉米漿8～12，MgSO₄·7H₂O?0.3～0.5，K₂HPO₄?0.5～2，含消泡劑聚氧乙烯氧丙烯甘三油0.5mL/L，pH?7.0～7.2，121℃滅菌20min；培養條件為：250mL三角瓶裝液30mL，搖瓶轉速200rpm，培養溫度37℃，培養時間8～12小時；一級種子培養基按體積百分2.5％接入裝液量為18升液體種子培養基的30升二級種子罐中，培養條件為：攪拌速度200rpm，控制通風量：0～5小時為8～10L/min，5～12小時為12～15L/min；控制培養溫度為35～40℃，培養時間8～12小時；

發酵培養：培養基組分以g/L計：蔗糖15～35，胰蛋白胨5～8，玉米漿12～15，MgSO₄·7H₂O?0.3～0.5，K₂HPO₄0.5～2，消泡劑聚氧乙烯氧丙烯甘三油2mL/L，pH?7.0～7.2，121℃滅菌20min，調pH?7.0～7.2；種子培養基按體積百分2.5％接入裝液量700升液體發酵培養基的1噸發酵罐中，培養條件為：攪拌速度200rpm，控制通風量：0～8小時為10～12L/min，8～16小時為14～16L/min；控制培養溫度為35～40℃，培養時間14～16小時；

(2)從發酵液中分離純化得到γ-谷氨酰轉肽酶酶粉；

將制得的發酵液經離心或板框過濾去菌體，制得發酵液上清液，經超濾除去鹽和雜蛋白，再經20％酒精沉淀，離心得沉淀，最后將沉淀進行冷凍干燥，即得γ-谷氨酰轉肽酶酶粉。