[發明專利]大球蓋菇菌種保藏方法

無效

• 申請號: 200810017694.4
• 申請日: 2008-03-04
• 公開（公告）號: CN101240241A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 孫智敏;季彬;曾楊;魏甲乾;祁宏山;張軍;趙小鋒;王治業;周劍平
• 申請（專利權）人: 甘肅省科學院生物研究所
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心
• 代理人: 張克勤

技術領域

本發明涉及一種食用菌菌種保藏方法，具體說是大球蓋菇的菌種保藏方法。

背景技術

菌種作為一種重要的生物資源，為了保持其優良性狀不變，應當及時對其進行保藏，目前食用菌菌種保藏方法主要有液氮低溫保藏法、斜面定期移植法、液體石蠟保藏法、砂土管保藏法以及自然基質保藏法等，其中液氮低溫保藏法是目前較為先進的一種方法，但費用較高，國外保藏機構多采用此法；在我國，目前生產或研究中所食用菌菌種仍然主要采用試管或瓶保藏法，主要缺點有：保存時間較短，菌種穩定性不好，易發生變異或退化，成本高，攜帶不方便等缺點。

現有食用菌菌絲體活干菌種及其生產方法，以菌絲體作為材料利用真空冷凍干燥技術凍干得到食用菌活干菌絲體菌種產品，但實踐表明菌絲體不適于凍干。

發明內容

本發明目的是提供一種大球蓋菇菌種保藏方法，

a)、配置引導馴化平板培養基：其組成配方：小麥提取液20g、酵母提取液1g、蔗糖0.75g、乳糖1g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、氯化鈉0.3g、檸檬酸鐵0.2g、瓊脂1.2g和蒸餾水92.55g，pH6.8，制成無菌平皿，待培養基凝固時，在培養基表面鋪設一層在培養基表面鋪設一層多孔紙。

b)、耐凍、耐負壓的菌絲體制備：然后待培養基冷卻至20～25℃時，將大球蓋菇菌種接種至載體上，在25℃無菌培養箱內培養144小時，然后在無菌條件下將載體連同菌種一并取下，并按照安瓿管(瓶)底部大小剪切至相應大小放置于安瓿管(瓶)底部，加入保護劑0.1～0.2mL，其配方如下：脫脂牛奶18g、葡萄糖1g、甘露醇2g、纖維素1g和蒸餾水100ml。

c)、菌絲體真空冷凍干燥：將安瓿管放入冷凍干燥機，降溫速度為每分鐘2℃，冷卻至-40℃，恒溫預凍1.5小時，然后開啟真空泵，在15分鐘內真空度達到22.5帕后，以每30分鐘隔板溫度升高5℃，真空度降低5帕，待隔板溫度升高至24℃，真空度降到0.8～1.3帕，樣品溫度升高至24℃時，真空冷凍干燥完成。

本發明通過對大球蓋菇菌絲體進行引導馴化，以提高其低溫耐凍性、耐負壓性及復水成活率等性能，然后制備冷凍管進行保藏。

本發明具有適用范圍廣、保藏期長、成活率高等優點。

具體實施方式

下面的實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。

實施例1：

首先配置引導馴化平板培養基，其組成配方：小麥提取液20g、酵母提取液1g、蔗糖0.75g、乳糖1g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、氯化鈉0.3g、檸檬酸鐵0.2g、瓊脂1.2g、蒸餾水92.55g，pH6.8，制成無菌平皿，待培養基略凝固時，在培養基表面鋪設一層在培養基表面鋪設一層多孔紙，然后待培養基冷卻至20～25℃時，將大球蓋菇菌種接種至載體上，在25℃無菌培養箱內培養144小時，然后在無菌條件下將載體連同菌種一并取下，并按照安瓿管(瓶)底部大小剪切至相應大小放置于安瓿管(瓶)底部，加入保護劑0.1～0.2mL，其配方如下：脫脂牛奶18g、葡萄糖1g、甘露醇2g、纖維素1g、蒸餾水100ml，將安瓿管放入冷凍干燥機，降溫速度為每分鐘2℃，冷卻至-40℃，恒溫預凍1.5小時，然后開啟真空泵，在15分鐘內真空度達到22.5帕后，以每30分鐘隔板溫度升高5℃，真空度降低5帕，待隔板溫度升高至24℃，真空度降到0.8～1.3帕，樣品溫度升高至24℃時，真空冷凍干燥完成。復水實驗結果顯示，菌種存活率75％以上。