[發明專利]一種新的11個X染色體STR基因位點及其分型方法

無效

• 申請號: 200810017404.6
• 申請日: 2008-01-25
• 公開（公告）號: CN101225387A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發明（設計）人: 李生斌;劉清波;余兵;張洪波
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司
• 代理人: 李鄭建

1.一種新的11個X染色體STR基因位點，其特征在于，該11個X染色體STR位點覆蓋了X染色體全長，在短臂的位點有DXS7130，DXS8378；其余都位于長臂上，它們是DXS7132，DXS7424，DXS6789，DXS6799，DXS7133，DXS101，DXS6804，HPRTB，DXS7423；所有位點片段大小適中，均適宜PCR擴增。

2.權利要求1所述的11個X染色體STR等位基因分型方法，其特征在于，包括下列步驟：

采用PCR分別擴增11個X染色體STR基因位點的DNA，并設計位點的上下游引物序列，將上下游引物稀釋成100μMOL/L，作為母液，取出10μ1稀釋到5μMOL/L，作為工作液；PCR擴增體系的體積為20μL，含1×反應緩沖液，1.5mMOL/L?Mgcl₂，0.5UTaq酶，0.25μMOL/L引物，200μMOL/LdNTP，DNA20～200ng。

PCR擴增基礎參數為：94℃預變性3min，94℃變性1min，根據位點的不同復性溫度進行30秒、72℃延伸1min，共計28-32個循環，最后72℃延伸15min；

擴增產物使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，采用銀染顯色方法，結合等位基因分型標準物進行標準化分型。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的等位基因分型標準物的制備包括下列步驟：

1)將具有不同基因型的純合子PCR產物分別與載體pGEM-T進行連接反應。

2)連接反應產物轉化大腸桿菌感受態細胞DH5α；

3)涂布在氨芐青霉素瓊脂平板上，過夜培養；

4)挑菌，大搖，提取質粒DNA，備用；

5)以質粒DNA為模板，作PCR擴增，對各等位基因分型標準物進行鑒定；注意同時用25bp?DNA標準參照物、測序樣本及標準細胞株GM9947A作對照，以確定標準片段大??；

6)確定片段大小后大量擴增，將不同大小片段的等位基因混合即成等位基因分型標準物。