[發(fā)明專利]一種新的10個(gè)Y染色體短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)及其分型方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810017379.1
• 申請(qǐng)日: 2008-01-22
• 公開（公告）號(hào): CN101225386A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李生斌;楊麗;賴江華;沈春梅;馬駿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 李鄭建

1.一種新的10個(gè)Y染色體STR基因位點(diǎn)，其特征在于，該10個(gè)Y染色體STR基因位點(diǎn)分別為：DYS459、DYS456、DYS460、DYS461、DYS462、DYS438、DYS439、DYS389?I、DYS389?II和DYS392；

上述STR基因位點(diǎn)，除DYS392位點(diǎn)的核心重復(fù)序列是三核苷酸，DYS438位點(diǎn)的核心重復(fù)序列是五核苷酸外，其余位點(diǎn)的核心重復(fù)序列均是四核苷酸。其中，擴(kuò)增片段最小的是DYS459位點(diǎn)，片段長(zhǎng)度為140-152bp，擴(kuò)增片段最大的位點(diǎn)是DYS389?II，片段長(zhǎng)度為359-383bp，所有位點(diǎn)片段長(zhǎng)度均適宜PCR擴(kuò)增。

2.權(quán)利要求1所述的新的10個(gè)Y染色體STR基因位點(diǎn)的分型方法，其特征在于，包括下列步驟：

采用PCR分別擴(kuò)增10個(gè)Y染色體STR基因位點(diǎn)的DNA，并設(shè)計(jì)位點(diǎn)的上下游引物序列，將上下游引物稀釋成100μMOL/L，作為母液，取出10μl稀釋到5μMOL/L，作為工作液；PCR擴(kuò)增體系的體積為20μL，含1×反應(yīng)緩沖液，1.5mMOL/L?Mgcl₂，0.5UTaq酶，0.25μMOL/L引物，200μMOL/LdNTP，DNA20～200ng。

PCR擴(kuò)增參數(shù)為：94℃預(yù)變性3min，94℃變性1min，根據(jù)位點(diǎn)的不同復(fù)性溫度進(jìn)行30秒、72℃延伸1min，共計(jì)30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸15min；

擴(kuò)增產(chǎn)物使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，采用銀染顯色方法，結(jié)合等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化分型。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物的制備包括下列步驟：

1)將具有不同基因型的純合子PCR產(chǎn)物分別與載體pGEM-T進(jìn)行連接反應(yīng)。

2)連接反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α；

3)涂布在氨芐青霉素瓊脂平板上，過夜培養(yǎng)；

4)挑菌，大搖，提取質(zhì)粒DNA，備用；

5)以質(zhì)粒DNA為模板，作PCR擴(kuò)增，對(duì)各等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行鑒定；注意同時(shí)用25bp?DNA標(biāo)準(zhǔn)參照物、測(cè)序樣本及標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞株GM9947A作對(duì)照，以確定標(biāo)準(zhǔn)片段大小；

6)確定片段大小后大量擴(kuò)增，將不同大小片段的等位基因混合即成等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物。