[發明專利]一種簡易檢測蛋雞禽流感和新城疫免疫抗體的方法

無效

• 申請號: 200810015253.0
• 申請日: 2008-04-14
• 公開（公告）號: CN101320043A
• 公開（公告）日: 2008-12-10
• 發明（設計）人: 秦鳳云
• 申請（專利權）人: 秦鳳云
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 泰安市泰昌專利事務所
• 代理人: 高軍寶

技術領域

本發明屬于禽類疫病檢測領域，具體說是一種簡易檢測蛋雞禽流感和新城疫免疫抗體的方 法。

背景技術

自高致病性禽流感H5N1在國內外發生以來，用疫苗免疫注射提高家禽的特異性免疫力，在 高致病性禽流感的預防、控制中起到了重要作用。為了切實掌握高致病性禽流感、新城疫等重 大動物疫病的流行規律和疫情動態，及時發現和消除疫情隱患，每年省、自治區、直轄市人民 政府獸醫主管部門根據國家動物疫病監測計劃下達本行政區域的動物疫病監測計劃。

雞高致病性禽流感、新城疫免疫效果的監測，需要按一定比例采樣，抽取雞血析出血清后， 做血凝和血凝抑制試驗來判定結果。采取雞血需要專業技術人員操作，并且需要采取必要的防 護隔離措施，如：穿戴隔離服、手套、口罩、頭套、腳套等，消耗大量的人力、物力。并且捉 雞、采血使雞產生較大的應激反應，對蛋雞產蛋有一定的影響。

發明內容

本發明的目的就在于提供一種簡易檢測蛋雞禽流感和新城疫免疫抗體的方法。本方法用雞 蛋檢測高致病性禽流感免疫抗體，不需要現場采血，采樣不需要專業技術，由養殖戶自己即可 完成，不需要幾人進入雞舍，可少用或不用采取防護措施。

本發明技術方案如下：

1禽流感血凝(HA)試驗(表格見附表一)

1.1在微量反應板的1-4排的1-12孔均加入0.025mlPBS液，更換滴頭。

1.2吸取0.025ml禽流感H5亞型抗原液加入第1孔，用微量移液器反復吹吸混勻。

1.3從第1孔吸取0.025ml抗原混合液加入第2孔，混勻后吸取0.025ml加入第3孔，如此進 行對倍稀釋至第11孔，至第11孔吸取0.025ml棄之，更換滴頭。

1.4每孔再加入0.025mlPBS液。

1.5每孔均加入0.025ml?1％的雞紅細胞懸液。

1.6將反映板放在微量振蕩器上振蕩1-3分鐘，置20℃-25℃室溫(如果環境溫度太低可放 在25℃恒溫箱內)下靜置40分鐘后觀察結果，對照孔紅細胞將呈明顯的鈕扣狀沉到孔底。

1.7結果判定：將反應板傾斜，觀察紅細胞有無淚滴狀流淌。完全血凝(不流淌)的抗原最高 稀釋倍數代表一個血凝單位。

以完全血凝的抗原最高稀釋倍數作為終點，終點稀釋倍數(取4個結果的平均值)除以4 即為含4個血凝單位的抗原的稀釋倍數。

注：新城疫血凝試驗與禽流感血凝試驗操作步驟基本相同，只是在1.2步中抗原液更換為新城 疫抗原。

2、禽流感血凝抑制(HI)試驗(表格見附表二)

2.1把已編好號的雞蛋用消毒劑洗凈，再用清水漂洗干掙，擦干備用。

2.2在微量反應板的第1孔、第12孔加入0.05mlPBS液、2-11孔均加入0.025mlPBS液。

2.3把雞蛋磕開，瀝出蛋清，只留蛋黃在半邊蛋殼中，用5ml注射器(去除針頭)吸取蛋黃0.2 -0.5ml，滴1滴(0.05ml)于微量反應板第1孔內。可如此反復，把其他雞蛋樣品加入微 量反應板每排的第1孔內。

2.4把微量反應板放在快速混勻器上(用手扶牢以免傾斜溢出)振蕩2-5分鐘，使蛋黃與PBS 液充分混合后，吸取0.05ml棄之(或做新城疫抗體檢測)，吸取0.025ml加入第2孔，用 微量移液器反復吹吸混勻吸取0.025ml加入第3孔，依次對倍稀釋至第10孔吸取0.025ml 棄之。

2.51-11孔均加入含4單位抗原的H5亞型抗原液0.025ml，放在微量振蕩器上振蕩混勻，置 20℃-25℃室溫下靜置30分鐘。

2.6每孔加入0.025ml的1％的雞紅細胞懸液，放在微量振蕩器上振蕩混勻，靜置40分鐘。

2.7結果判定：

以完全抑制4個單位抗原的最高稀釋倍數作為HI滴度。判定結果時為避免卵黃的影響，可 在微量反應板反面觀察凝聚圖形，HI價大于或等于5Log2判定免疫良好。

注：微量移液器可使用單道、8道、12道移液器。

3新城疫血凝抑制(HI)試驗(表格見附表三)