[發明專利]從藍藻中快速分離純化C－藻藍蛋白和異藻藍蛋白的方法

無效

• 申請號: 200810014404.0
• 申請日: 2008-02-28
• 公開（公告）號: CN101240010A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 張玉忠;顏世敢;陳秀蘭;張熙穎;周百成
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司
• 代理人: 許德山

1、從藍藻中快速分離純化C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白的方法，步驟如下：

(1)原料為藍藻，采用液氮研磨的方法，使藍藻解體溶解，離心去除細胞殘渣，收集上清液得到C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白粗提液；

(2)將步驟(1)的粗提液，用硫酸銨沉淀法，使C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白從粗提液中沉淀出來，離心收集沉淀，再用pH5.8～6.0、20mM磷酸緩沖液溶解并透析，除去硫酸銨，即得C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白溶液；

(3)將步驟(2)制得的C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白溶液，用離子交換層析，并用具有恒定的離子強度、連續pH梯度的緩沖液進行洗脫，分別獲得高純度的C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白。

2、如權利要求1所述的從藍藻中快速分離純化C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(1)具體如下：

取新鮮的藍藻，按重量體積比1∶1加入液氮研磨磨碎，然后按重量體積比1∶1加入0.02mol/L磷酸緩沖液(pH5.8～6.0)，溶解，4℃下，8000rpm～10000rpm離心10min～15min，上清液即為C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白的粗提液。

3、如權利要求1所述的從藍藻中快速分離純化C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白的方法，其特征在于，所述藍藻為單細胞藍藻，選自螺旋藻或集胞藻。

4、如權利要求1所述的從藍藻中快速分離純化C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(2)具體操作為：向上述步驟(1)得到的C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白粗提液中加入固體硫酸銨，至濃度為55～60％，重量體積比，放置5～6h，然后在4℃下，8000rpm～10000rpm離心10min～15min，取沉淀，并將沉淀溶于pH5.8～6.0的20mM的磷酸緩沖液中，將溶有沉淀的磷酸緩沖液進行透析，透析液即為C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白溶液。

5、如權利要求1所述的從藍藻中快速分離純化C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白的方法，其特征在于，所述步驟(3)具體操作如下：

取步驟(2)制得的C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白溶液1.5～2.5ml，上DEAE?Sepharose?FastFlow離子交換色譜柱，然后用pH5.6、含0.05mol/L?NaCl的20mmol/L醋酸緩沖液洗脫，再用pH5.8、含0.05mol/L?NaCl的20mmol/L醋酸緩沖液和pH4.0、含0.05mol/L?NaCl的20mmol/L醋酸緩沖液各100mL進行梯度洗脫，洗脫速度為1～1.2mL/min，檢測波長280nm，根據洗脫曲線分別收集C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白，得到高純度的C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白。

6、如權利要求5所述的從藍藻中快速分離純化C-藻藍蛋白和異藻藍蛋白的方法，其特征在于，所述DEAE?Sepharose?Fast?Flow離子交換色譜柱是經pH5.8、含0.05mol/L?NaCl的20mmol/L醋酸緩沖液預先平衡的，規格為0.6×10cm。