[發明專利]一種對豬體核酸疫苗具有免疫增強作用的CpG基序

無效

• 申請號: 200810014059.0
• 申請日: 2008-01-23
• 公開（公告）號: CN101423832A
• 公開（公告）日: 2009-05-06
• 發明（設計）人: 王金寶;溫建新;朱新產;李俊;任慧英;吳家強;張秀美;周順
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;A61K39/39;A61P37/04
• 代理公司: 濟南信達專利事務所有限公司
• 代理人: 姜 明

1、一種對豬體核酸疫苗具有免疫增強作用的CpG基序，用于其合成的引 物序列為：

7-A：CTCATCGATCCTATCGATCCTATCGATCCTATCGATCCTATCGATCCTATCGATGGGCC

7-B：CATCGATAGGATCGATAGGATCGATAGGATCGATAGGATCGATAGGATCGATGAGGGCC。

2、一種對豬體核酸疫苗具有免疫增強作用的CpG基序，其免疫增強作用的 檢測步驟如下：

1)選擇120日齡健康豬15頭為原料備用；

2)外周血淋巴細胞的分離培養；

3)脾臟免疫細胞的分離；

4)活力檢測與計數；

5)外周血淋巴細胞和脾臟免疫細胞增殖試驗，即MTT法；步驟如下：

a將96孔細胞培養板分成12組，每組三孔；將懸浮細胞的細胞培養液加入 細胞培養板，從第一組至陰性對照，每組三個重復，每孔150μL；

b空白對照孔加入150μL無細胞的細胞培養液，三個重復；

c將CpG基序調整為100μg/mL，樣品分別加入第1組至第9組，每組三個 重復，每孔10μL；

d陽性對照加入ConA?100μg/mL，三個重復，每孔10μL；空白對照加入細 胞培養液，三個重復，每孔10μL；

e將細胞培養板放入置37℃，CO₂培養箱中培養48h，每孔加入10ulMTT， 5μg/μL，繼續培養4h，然后每孔加入100μL的DMSO，使紫黑色結晶完全溶解， 測定OD₄₉₀的值，同時設不加細胞的營養液對照，以待測樣品D₄₉₀減去培養液對 照孔D₄₉₀，即為試驗孔A值；以刺激指數“SI”作為判斷淋巴細胞轉化程度的 參數，應用方差分析進行差異顯著性檢驗；

6)數據處理

以刺激指數(SI)作為判斷淋巴細胞轉化程度的參數，SI大于2具有刺激 效果，應用公式計算如下：

SI＝(ODs-ODb)/(ODn-ODb)

ODs：樣品(samole)孔OD值；

ODb：空白(blank)孔OD值；

ODn：陰性(negative)孔OD值。