[發明專利]一種用于檢測具有降壓功能的藥物成分的蛋白芯片

無效

• 申請號: 200810012743.5
• 申請日: 2008-08-07
• 公開（公告）號: CN101344527A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 華子昂
• 申請（專利權）人: 華子昂
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/00
• 代理公司: 大連科技專利代理有限責任公司
• 代理人: 于忠晶

一、技術領域：

本發明涉及藥物檢測領域，特別是藥物成分檢測領域。

二、背景技術：

如何分離和鑒定藥的有效成份是目前中藥產業和傳統的西藥開發遇到的重大障礙，

三、發明內容：

本發明的目的是克服上述不足問題，提供一種用于檢測具有降壓功能的藥物成分的蛋白芯片，對生物分子準確、快速、大信息量的檢測。本發明的另一個目的是提供其制法，制法簡單易操作，產品性能穩定，本發明最后的目的是提供其檢測方法，操作簡單，結果準確。

本發明為實現上述目的所采用的方案是：一種用于檢測具有降壓功能的藥物成分的蛋白芯片，BSA-NHS玻片上固定有靶蛋白血管緊張素轉換酶或肽基二肽水解酶。

所述玻片上的靶蛋白分為若干個區域，區域間為親水處理帶。

本發明蛋白芯片的制法，具體步驟為：

第一步玻片制作：N，N-碳酸雙羥琥亞胺酯(100mmol/L)和N，N-二異丙基乙胺(100mmol/L)溶于無水N，N-二甲基甲酰胺中配制成混合液，將醛基化玻片浸入上述混合液中室溫條件下浸泡3h，取出玻片后用95％乙醇沖洗玻片兩次，再將玻片浸入磷酸鹽緩沖液中室溫下浸泡12h，取出玻片先后用蒸餾水沖洗玻片兩次、95％乙醇沖洗玻片兩次，離心以甩掉多余溶液，最后將玻片浸入N，N-二甲基甲酰胺中室溫下放置3h，取出玻片后用95％乙醇沖洗玻片4遍，離心即成為BSA-NHS玻片，室溫下貯存于真空干燥器中，2個月無明顯的活性丟失；

第二步固定靶蛋白：待固定的靶蛋白溶于40％的甘油和60％的磷酸鹽緩沖液的混合液，靶蛋白終濃度為100μg/ml，將上述靶蛋白溶液用點樣機點至第一步制得的醛基化玻片上，室溫濕室放置3h，倒轉玻片浸入磷酸鹽緩沖液中，一分鐘后取出玻片并將玻片正向浸入BSA溶液中，室溫下輕度振蕩放置1h，取出玻片，用磷酸鹽緩沖液沖洗玻片即制得用于檢測具有降壓功能的藥物成分的蛋白芯片。

所述第一步玻片制作：N，N-碳酸雙羥琥亞胺酯(100mmol/L)和N，N-二異丙基乙胺(100mmol/L)溶于無水N，N-二甲基甲酰胺中，三者按1∶1∶2重量比配制成混合液，將醛基化玻片浸入上述混合液中室溫條件下浸泡3h，取出玻片后用95％乙醇沖洗玻片兩次，再將玻片浸入濃度0.2mol/L磷酸鹽緩沖液中室溫下浸泡12h，取出玻片先后用蒸餾水沖洗玻片兩次、95％乙醇沖洗玻片兩次，離心以甩掉多余溶液，最后將玻片浸入濃度99％的N，N-二甲基甲酰胺中室溫下放置3h，取出玻片后用95％乙醇沖洗玻片4遍，離心即成為BSA-NHS玻片，室溫下貯存于真空干燥器中，2個月無明顯的活性丟失；

第二步固定靶蛋白：待固定的靶蛋白溶于40％的甘油和60％的磷酸鹽緩沖液的混合液，靶蛋白終濃度為100μg/ml，將上述靶蛋白溶液用點樣機點至第一步制得的醛基化玻片上，室溫放置3h，倒轉玻片浸入0.2mol/L磷酸鹽緩沖液中，一分鐘后取出玻片并將玻片正向浸入20μg/mL?BSA溶液中，室溫下輕微振蕩放置1h，取出玻片，用0.2mol/L磷酸鹽緩沖液沖洗玻片即制得用于檢測具有降壓功能的藥物成分的蛋白芯片。

所述第二步固定靶蛋白：蛋白點樣至玻片上室溫下放置3h，倒轉浸入磷酸鹽緩沖液一分鐘后取出玻片并將玻片正向浸入甘氨酸溶液，室溫下輕微振蕩放置1h，取出玻片即制得用于檢測具有降壓功能的藥物成分的蛋白芯片。

所述醛基化玻片為30CMT-GAP玻片，表面帶有氨基，

所述靶蛋白在玻片上被分為若干區域，區域間做疏水處理。

本發明用于檢測具有降壓功能的藥物成分的蛋白芯片檢測藥物成分的方法：采用熒光檢測法，熒光標記待測蛋白(與固定蛋白配對特異結合)后用磷酸鹽緩沖液稀釋，加樣至玻片固定靶蛋白上，室溫濕室反應1h，取出玻片，磷酸鹽緩沖液沖洗，再用磷酸鹽緩沖液與0.1％吐溫20按10∶1體積比混合液(PBST)洗3次，每次3min。然后，磷酸鹽緩沖液沖洗2次，離心1-2min甩掉多余緩沖液，用熒光檢測儀觀測熒光結果。

本發明蛋白芯片將大量蛋白質分子按預先設置的排列固定于一種載體表面行成微陣列，根據蛋白質分子間特異性結合的原理，構建微流體生物化學分析系統，以實現對生物分子的準確、快速、大信息量的檢測。能夠大規模地篩選、通用性強，能夠從基因水平解釋藥物的作用機理，即可以利用芯片分析用藥前后機體的不同組織、器官基因表達的差異。

四、具體實施方式：

下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明，但本發明不限于具體實施例。

實施例1