[發(fā)明專利]一種檢測土壤酸性磷酸單酯酶活性的分析方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810012246.5
• 申請日: 2008-07-09
• 公開（公告）號: CN101625311A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張玉蘭;武志杰;陳利軍;陳振華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;C12Q1/44
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 馬 馳;周秀梅

1.一種檢測土壤中酸性磷酸單酯酶活性的分析方法，其特征在于：

1)分別稱取1-2g鮮土樣品2n份分別置入2n個三角瓶中，n≥3，分成二組，每組n個，向二組2n個三角瓶中加入0.2-0.4ml分析純甲苯和4-8ml?pH6.45-6.55緩沖溶液試劑，向第一組n個三角瓶中加入1-2mL?25-50m?moL·L^-1的底物對硝基苯磷酸二鈉工作液，以第二組n個三角瓶中作為樣本對照，混勻，蓋好瓶塞，放在36.5-37.5℃恒溫培養(yǎng)中恒溫培養(yǎng)1-2h；

2)培養(yǎng)結(jié)束后，向所有三角瓶中加入4-8mL?0.95-0.15moL·L^-1pH＝11.5-12.5的堿性三羥基氨基甲烷溶液和1-2mL?0.25-0.5moL·L^-1氯化鈣溶液，向樣本對照組n個三角瓶中添加1-2mL?25-50m?moL·L^-1的底物對硝基苯磷酸二鈉工作液，混勻，過濾；

3)用分光光度法于410nm處分別測定上述所得三角瓶中溶液的吸光度A；

以對硝基苯酚溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液，以對硝基苯酚溶液的系列濃度和其分別用分光光度法在410nm測定的吸光值A(chǔ)’制作工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到斜率b；

根據(jù)吸光值A(chǔ)和斜率b，計算所測定濾液中對硝基苯酚的濃度S，S＝A*b；計算樣品中對硝基苯酚含量m₁；

4)計算磷酸單酯酶酶活性：

計算公式為：w＝m₁/(m₂×K)＝Sμg?C₆H₅NO₃·g^-1干土·h^-1

式中：w：單位土壤單位時間內(nèi)對硝基苯酚的產(chǎn)生量；m₁：測試溶液中對硝基苯酚的質(zhì)量，樣品測定吸光值折換的產(chǎn)物質(zhì)量值；m₂：鮮土樣品質(zhì)量；k：水分系數(shù)，單位重量的烘干土重/鮮土重。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于：當(dāng)步驟3)中的待測液顏色明顯超過制作標(biāo)準(zhǔn)曲線最高濃度時的顏色，表明其中對硝基苯酚含量過高，則用原緩沖溶液稀釋5-10倍后再進(jìn)行比色，若第一次稀釋后顏色還是過深，則重復(fù)上述稀釋過程；最終再用分光光度法于410nm處測定溶液的吸光度A。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述制作工作標(biāo)準(zhǔn)曲線過程為，稱取1000mg對硝基苯酚溶解于1L蒸餾水中，制備1mg·mL^-1標(biāo)準(zhǔn)貯備液；吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液1mL，定容到100mL，此為0.01mg·mL^-1對硝基苯酚的溶液；再分別吸取該液0、1、2、3、4、5mL于試管中，用蒸餾水分別補(bǔ)足到相同體積5mL，加入4mL?0.1moL·L^-1堿性三羥基氨基甲烷溶液和1mL?0.5moL·L^-1氯化鈣溶液，顯色、混勻，過濾到比色試管中，與樣品一起在410nm測定吸光度A’；此標(biāo)準(zhǔn)系列含對硝基苯酚的濃度分別為0、1、2，3、4和5μg·mL^-1，以對硝基苯酚溶液的系列濃度和測定的吸光值A(chǔ)’制作工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到斜率b。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述反應(yīng)終止液為堿性THAM緩沖溶液，稱取12.2g三羥基氨基甲烷于800mL蒸餾水中，用0.5mol·L^-1的NaOH調(diào)節(jié)pH至12.0，用蒸餾水定容到1000mL。