[發明專利]具有雌激素活性的山茶黃酮苷A及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 200810011096.6
• 申請日: 2008-04-17
• 公開（公告）號: CN101270139A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發明（設計）人: 王永奇;唐玲;馮寶民;史麗穎
• 申請（專利權）人: 大連大學
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;A61K31/7048;A61P5/30;A61P19/10
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司
• 代理人: 畢進

技術領域

本發明涉及對天然植物中具有藥用活性的新成分的制備及應用。

背景技術

本發明人對山茶屬植物的研究始于2002年，在與日本太田油脂株社和廣西巴馬萬力山茶籽發展有限公司聯合開發茶油的過程中，先后赴山茶屬植物的主產區廣西、云南、四川、湖南進行了資源調查。

山茶屬(Camellia?Linn.)植物屬于山茶科，全世界有280種，主要分布于熱帶及亞熱帶。我國有250種以上，主產于西南至東南部。嶺南地區分布最多，近百種。

藥用收載的有茶的果實(茶子)、芽葉(茶葉)和根(茶樹根)，油茶的種子(茶子心)、脂肪油(茶油)、油粕(茶麩)、花(茶子木花)和根皮(油茶根皮)，山茶的花及普洱茶葉。茶油亦為中華人民共和國藥典收載。但對山茶屬植物藥用價值的現代研究甚少。

在資源調查的基礎上，我們以資源豐富的山茶屬植物為重點，分花、種子、果皮、茶麩和枝葉進行原料采集。繼之，我們經歷5年時間，對山茶屬植物的藥用價值進行了系統地研究，取得了突破性進展和多項創新性發現。特別是對其抗骨質疏松的研究。

本發明的發明人在研究過程中曾以維甲酸引發的大鼠骨質疏松模型為指標進行了活性篩選，發現南山茶(C.semiserrata?Chi.)種子的乙醇提取物活性最強，明顯高于陽性對照藥。經定性、定量分析確認其有效部位為黃酮類成分，此項研究中標了國家自然科學基金項目《南山茶抗骨質疏松物質基礎、作用機理及構效關系的研究》(批準號：30772714)。本發明的發明人認為有必要對此活性的進行分子基礎的研究，以期獲得具體的具有確定活性化合物。

發明內容

本發明的目的在于尋找該植物中具有藥用活性的新的天然產物成分。

本發明所述的具有雌激素活性的山茶黃酮苷A具有如下結構式：

本發明的另一目的是提供該化合物的制備方法，該方法包括如下步驟：

①制備南山茶種子90～98％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物；

②以硅膠柱色譜分離上述乙酸乙酯萃取物，氯仿∶甲醇12～18∶1(體積)混合溶液等度洗脫，得混合物；

③繼續以硅膠柱色譜分離上述混合物，氯仿∶甲醇18～22∶1(體積)混合溶液洗脫得山茶黃酮苷A。

上述山茶黃酮苷A的制備方法中，步驟②柱色譜洗脫液優選氯仿∶甲醇15∶1(體積)混合溶液。

步驟③中柱色譜洗脫液優選氯仿∶甲醇20∶1(體積)混合溶液。

本發明所述的上述山茶黃酮苷A的制備方法中，所述的步驟①的具體操作方法是：以90～98％工業乙醇加熱回流提取，料液比1∶8～12(g∶ml)，溫度90～100℃，提取3次，每次3小時；乙醇提取物濃縮成浸膏后以2～5倍蒸餾水混懸，并按照體積比依次用3倍石油醚和3倍乙酸乙酯各萃取3次，得乙酸乙酯萃取物。

其中，優選以95％工業乙醇加熱回流提取，優選料液比1∶10(g∶ml)，優選溫度95℃；混懸蒸餾水優選3倍體積。

具體來說，該山茶黃酮苷A的制備方法包括如下步驟：

①制備南山茶種子95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物：以95％工業乙醇加熱回流提取，料液比1∶10(g∶ml)，溫度95℃，提取3次，每次3小時；乙醇提取物濃縮成浸膏后以3倍蒸餾水混懸，并按照體積比依次用3倍石油醚和3倍乙酸乙酯各萃取3次，得乙酸乙酯萃取物；

②以硅膠柱色譜分離上述乙酸乙酯萃取物，氯仿∶甲醇15∶1(體積)混合溶液等度洗脫，得混合物；

③繼續以硅膠柱色譜分離上述混合物，氯仿∶甲醇20∶1(體積)混合溶液洗脫得山茶黃酮苷A。

為了進一步純化所得山茶黃酮苷A，還可以在最后加上用Sephadex?LH20純化的步驟，可得黃色粉末狀產品。

通過結構式和系統命名在SciFinder?Scholar數據庫查詢，證明所得的上述山茶黃酮苷A具有新穎的結構，是新化合物。

本發明繼續對對上述山茶黃酮苷A的活性進行了檢測：利用重組人雌激素受體基因酵母檢測化合物的雌激素活性。重組人基因酵母法是使用比較廣泛的一種體外檢測方法，具有靈敏、快速、廉價等特點。它是將2個基因片段引入到酵母中，一個為人雌激素受體基因(hER)，另一個為與雌激素受體響應元件(ERE)相連的β-半乳糖苷酶(LacZ)報告基因。當類雌激素物質加入培養基中與ER結合，啟動基因的轉錄，產生和分泌β-半乳糖苷酶。β-半乳糖苷酶能與其底物反應生成明黃色物質，通過測定A₄₂₀的吸光度可以測定β-半乳糖苷酶的活性，從而可以得出被測物質的雌激素活性。