[發(fā)明專利]用于制備檢測DNA甲基化試樣的試樣處理液和試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810008337.1
• 申請日: 2008-02-26
• 公開（公告）號: CN101255476A
• 公開（公告）日: 2008-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梶田昌裕;酒井綾子;山本憲明;石原英干
• 申請（專利權(quán)）人: 希森美康株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京金之橋知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 梁朝玉;劉良勇

1.一種用來制備DNA檢測用試樣的試樣處理液，其特征在于：所述試樣處理液含有蛋白酶和水性溶劑。

2.如權(quán)利要求1所述的試樣處理液，其特征在于：還含有表面活性劑和/或離液劑。

3.如權(quán)利要求2所述的試樣處理液，其特征在于：表面活性劑是選自十二烷基硫酸鈉、十四烷硫酸鈉、十二(烷)磺酸鈉、十四烷磺酸鈉、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、牛磺膽酸鈉和牛磺脫氧膽酸鈉中的至少一種。

4.如權(quán)利要求2所述的試樣處理液，其特征在于：離液劑是選自硫氰酸胍、硫氰酸鈉、鹽酸胍、碘化鈉、碘化鉀和尿素中的至少一種。

5.如權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的試樣處理液，其特征在于：其中還含有可以切斷DNA的切斷劑。

6.如權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的試樣處理液，其特征在于：其pH值為7～10。

7.一種制備DNA甲基化檢測用試樣的試劑盒，其包括：

由權(quán)利要求1～4其中任一所述的試樣處理液構(gòu)成的第一試劑；

含將DNA所含非甲基化胞核嘧啶誘變?yōu)槠渌麎A基的誘變劑的第二試劑。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述誘變劑為重亞硫酸鹽。

9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于：所述重亞硫酸鹽的濃度為3～10M。

10.一種DNA甲基化檢測用試樣的制備方法，包括：

混合步驟，將含有蛋白酶和水性溶劑的試樣處理液和含有細(xì)胞的生物樣本混合；

誘變步驟，在所得混合液中加入可使DNA所含非甲基化胞核嘧啶轉(zhuǎn)換成其他堿基的誘變劑，將混合液中的DNA所含非甲基化胞核嘧啶轉(zhuǎn)換成其他堿基。

11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于：所述生物樣本為血清、血漿、生物組織或乳腺分泌液。

12.如權(quán)利要求10或11所述的方法，其特征在于：所述細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞。

13.如權(quán)利要求10或11所述的方法，其特征在于：還包括溶解步驟，即在混合試樣處理液和生物樣本之前，先用含表面活性劑和/或離液劑的溶解液溶解含細(xì)胞的生物樣本。

14.一種DNA甲基化檢測方法，包括：

混合步驟，將含有蛋白酶和水性溶劑的試樣處理液和含有細(xì)胞的生物樣本混合；

誘變步驟，在所得混合液中加入可使DNA所含非甲基化胞核嘧啶誘變?yōu)槠渌麎A基的誘變劑，將混合液中的DNA所含非甲基化胞核嘧啶變?yōu)槠渌麎A基；

檢測步驟，用在誘變步驟中獲得的DNA甲基化檢測試樣和與誘變步驟前混合液中的DNA一定區(qū)域雜交的多核甙酸檢測DNA甲基化檢測試樣中所含DNA的甲基化。

15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于：所述的DNA一定區(qū)域是含有基因CpG島的區(qū)域。

16.一種試樣處理液作為制備檢測DNA甲基化試樣的應(yīng)用，其特征在于：所述的試樣處理液中包含有蛋白酶和水性溶劑。