[發(fā)明專利]一種抗HCV的疫苗及其制備方法和用途無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200780052831.1 | 申請日： | 2007-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN101663399A | 公開（公告）日： | 2010-03-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 魏來;田園 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京大學(xué)人民醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12N15/51 | 分類號： | C12N15/51;C12N15/85;C12N15/86;C12N15/861;C07K14/18;A61K48/00;A61P1/16;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 謝順星 |
| 地址： | 中國北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 hcv 疫苗 及其 制備 方法 用途 | ||
1.一種抗HCV的疫苗，其是通過將HCV的非結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)組合后與腺病毒載體重組制備而成，其特征在于，所述的非結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)組合為NS3/NS4或NS4/NS5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述的腺病毒為復(fù)制缺陷型Ad5。
3.一種制備權(quán)利要求1或2所述疫苗的方法，其包括步驟：
1)制備目的基因：設(shè)計(jì)引物，通過RT-PCR擴(kuò)增出HCV?NS3/NS4或NS4/NS5基因；
2)將HCV?NS3/NS4或NS4/NS5基因克隆至Pshuttle-CMV質(zhì)粒，具體為：將所述基因分別和所述質(zhì)粒按摩爾比3:1進(jìn)行連接；
3)將攜帶目的基因的Pshuttle-CMV質(zhì)粒與腺病毒骨架質(zhì)粒Adeasy1重組；
4)酶切步驟3)得到的重組質(zhì)粒，釋放腺病毒基因組，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293細(xì)胞、反復(fù)凍融2-3次，CsCl密度梯度離心，然后將純化后的基因組結(jié)構(gòu)均一的重組腺病毒凍存。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，RT-PCR擴(kuò)增的引物為：
。
5.權(quán)利要求1或2所述的疫苗在制備治療丙型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物是載體疫苗與免疫增強(qiáng)劑的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，所述的免疫增強(qiáng)劑為IL-12、脫氧核苷酸或大腸桿菌DNA形式的未甲基化的CpG基序、CaCl2、PEG6000或Freund′s佐劑中的一種或多種。?
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