[發(fā)明專利]用于富集、除去和檢測革蘭氏陽性細菌的方法和手段

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200780051424.9
• 申請日: 2007-12-21
• 公開（公告）號: CN101636415A
• 公開（公告）日: 2010-01-27
• 發(fā)明（設計）人: 馬丁納·貝辛格;斯蒂芬·米勒;安賈·菲利普;邁克爾·許茨
• 申請（專利權）人: 拜奧默里克斯公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N9/88;C07K14/315;G01N33/569
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 張文輝

發(fā)明領域

本發(fā)明涉及包含內溶素(endolysin)或另一種細胞壁溶解酶(lysing?enzyme) 的無酶促活性細胞壁結合結構域和依照SEQ?ID?NO：1的序列或其衍生物的 多肽，以及其制備手段，其中除所述細胞壁結合結構域之外，所述多肽不包 含內溶素或另一種細胞壁溶解酶的別的結構域。本發(fā)明還涉及用于結合、富 集、從樣品中除去、捕獲和/或檢測細菌(特別是革蘭氏陽性細菌)的方法。

發(fā)明背景

革蘭氏陽性細菌在環(huán)境中廣泛傳播。它們不僅可在土壤、水、植物材料、 糞便等樣品中找到，而且還可在人和動物中找到。利斯特氏菌(listeria)、桿 菌(bacillus)、梭菌(clostridium)、葡萄球菌(staphylococcus)、鏈球菌 (streptococcus)、腸球菌(enterococcus)、微球菌(micrococcus)或分枝桿菌 (mycobacteria)等種類的整個病原體細菌系列在食物方面以及在人和動物的 感染疾病的預防、診斷和治療中有顯著的關聯(lián)性。

蠟狀芽孢桿菌(Bacillus?cereus)群的細菌代表具有重要的經(jīng)濟和醫(yī)學價值 以及在生物恐怖主義方面具有突出關聯(lián)性的微生物。這些細菌在群內彼此密 切相關；大量的所述細菌已經(jīng)被測序(Rasko等，F(xiàn)EMS?Microbiol.Reviews， 2005，29，303-329)。它們在自然界中廣泛傳播，而且存在于不同種類的食物 (大多數(shù)為植物來源)之中。它們是需氧生存的、活動的、桿狀革蘭氏陽性 細菌。由于其抗逆性內生孢子，它們能夠經(jīng)受加工處理食物所使用的不同方 法，例如如干燥或加熱。通常，受污染的食物主要是含有淀粉的食物、谷類、 稻、香料、蔬菜和即食(ready-to-eat)產(chǎn)品。肉類可通過使用受污染的香料而 受污染。因為孢子能幸免于巴氏滅菌法，隨后無限制的增殖是有可能的，所 以乳制品經(jīng)常受到污染。蠟狀芽孢桿菌群由6種密切相關的種組成，除食物 病菌蠟狀芽孢桿菌外，還包括極端危險的人病原體細菌炭疽芽孢桿菌 (Bacillus?anthracis)(其在生物恐怖主義方面具有極大的關聯(lián)性)、昆蟲病原 體蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis)(通過基于蘇云金芽孢桿菌的微生 物學殺蟲劑而廣泛傳播)、根狀樣蕈狀芽胞桿菌(Bacillus?mycoides)以及假真 菌樣芽孢桿菌(Bacillus?pseudomycoides)和韋氏芽孢桿菌(Bacillus weihenstephanensis)。

利斯特氏菌是人和動物病原體細菌，通常存在于食物中，特別是在魚、 肉和乳制品中。利斯特氏菌屬包含6個不同種，其中有16個不同的血清型。 雖然食物相關疾病的僅小部分是由利斯特氏菌引起的(在美國約1％)，但是 每年幾乎30％的由食物病原體引起的致命疾病是由該病菌引起的。染病者主 要是免疫抑制人群，例如老年人、糖尿病患者、癌癥患者和/或AIDS患者。 孕婦和尚未出生的孩子占所有的利斯特氏菌病患者病例的25％。

目前，葡萄球菌和腸球菌是與感染疾病有關的最難解決的病原體，因為 它們日益形成多種耐藥性病菌(例如MRSA——多耐藥性金黃色葡萄球菌和 VRE——萬古霉素耐藥性腸球菌)，導致主要在固定健康護理方面的顯著發(fā) 展，即不良的疾病預后以及費用的激增。

潛在的病原體通常以很少的細胞數(shù)目存在于感染狀態(tài)和食物區(qū)域中，另 外還伴隨有干擾性背景菌群。一方面，需要用于有效除去相關革蘭氏陽性病 菌的方法，另一方面，需要用于選擇性富集這些病菌的方法，以便例如實現(xiàn) 靈敏檢測。

好檢測方法的標準是靈敏性、快速、可靠性以及簡單和劃算的應用。