[發(fā)明專利]用于富集、除去和檢測革蘭氏陽性細(xì)菌的方法和手段有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200780051424.9 | 申請日： | 2007-12-21 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN101636415A | 公開（公告）日： | 2010-01-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬丁納·貝辛格;斯蒂芬·米勒;安賈·菲利普;邁克爾·許茨 | 申請（專利權(quán)）人： | 拜奧默里克斯公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K19/00 | 分類號(hào)： | C07K19/00;C12N15/62;C12N9/88;C07K14/315;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律師事務(wù)所 | 代理人： | 張文輝 |
| 地址： | 法國埃*** | 國省代碼： | 法國;FR |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 富集 除去 檢測 革蘭氏 陽性 細(xì)菌 方法 手段 | ||
1.由下述組成的多肽：
i)內(nèi)溶素或另一種細(xì)胞壁溶解酶的無酶促活性的細(xì)胞壁結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中所述無酶促活性的細(xì)胞壁結(jié)合結(jié)構(gòu)域選自：SEQ?ID?NO：19、21、23-33，和
ii)JS標(biāo)簽，其選自SEQ?ID?NO：1-18，其中所述JS標(biāo)簽位于i)中所述的序列的C-或N-末端，并且任選地
iii)接頭，其選自由SEQ?ID?NO：34-38組成的組的序列，其中接頭位于i)中所述的序列和ii)所描述的序列之間，和/或
iv)間隔區(qū)序列，其選自GFP、GST或MBP組成的組，其中所述間隔區(qū)位于i)中所述的序列和ii)所描述的序列之間，
其中除i)中所述細(xì)胞壁結(jié)合結(jié)構(gòu)域之外，所述多肽不包含內(nèi)溶素或另一種細(xì)胞壁溶解酶的別的結(jié)構(gòu)域，并且其中多肽能夠結(jié)合革蘭氏陽性細(xì)菌，但在SEQ?ID?NO：19的情況中多粘芽孢桿菌(B.polymyxa)和球形芽孢桿菌(B.sphaericus)除外，和通過蛋白生物素連接酶而被體內(nèi)生物素化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的多肽，其中所述多肽是生物素化的。
3.根據(jù)上述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多肽，其顯示由下組序列組成的序列：
i)選自SEQ?ID?NO：8的序列，
ii)選自SEQ?ID?NO：19的序列，
iii)選自SEQ?ID?NO：35的序列，和任選地
iv)作為間隔區(qū)的GFP、GST或MBP序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的多肽，其為所示SEQ?ID?NO：42-43的序列之一。
5.編碼根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的多肽的核酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的核酸，其中編碼SEQ?ID?NO：1-18的序列的N端序列以選自SEQ?ID?NO：54-56的序列開始。
7.編碼根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的多肽的載體。
8.表達(dá)根據(jù)權(quán)利要求5或6的核酸或依照權(quán)利要求7的載體的細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的多肽之一用于結(jié)合、富集、從樣品中除去、捕獲和/或檢測細(xì)菌的用途，其中所述用途不是疾病的診斷或治療方法。
10.用于富集、除去、捕獲和/或檢測來自樣品的細(xì)菌的方法，其中所述方?法不是疾病的診斷或治療方法，其包括以下步驟：
a)使樣品與生物素化的依照權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的多肽接觸和/或一起溫育，
b)使步驟a)中獲得的所述多肽-細(xì)菌復(fù)合物與提供生物素結(jié)合物質(zhì)的載體接觸和/或一起溫育，
c)將步驟b)中獲得的所述載體-多肽-細(xì)菌復(fù)合物與所述樣品分開，
d)任選地，自所述載體-多肽-細(xì)菌復(fù)合物清洗非特異性附著的樣品成分，
e)任選地，將所述載體與所述多肽-細(xì)菌-復(fù)合物分開，并
f)任選地，檢測所述細(xì)菌。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述生物素結(jié)合物質(zhì)包含親合素或鏈霉抗生物素蛋白。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述方法經(jīng)由磁性、層析或分批方法來實(shí)施。
13.根據(jù)權(quán)利要求10至12任一項(xiàng)的方法，其中步驟f)中的所述檢測經(jīng)由選擇性生長條件、基于核酸的方法；細(xì)菌細(xì)胞壁及其成分的檢測，細(xì)菌成分的檢測經(jīng)由偶聯(lián)有標(biāo)志物的別的特異性細(xì)胞壁結(jié)合結(jié)構(gòu)域，和/或經(jīng)由微生物學(xué)、形態(tài)學(xué)和/或生化檢測方法的組合來實(shí)施。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述基于核酸的方法選自下組：PCR、RT-PCR、PCR-RFLP、rep-PCR指紋法、NASBA、DNA雜交方法、多基因座序列分型(MLST)和rRNA比較。
15.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述細(xì)菌細(xì)胞壁及其成分的檢測分別經(jīng)由內(nèi)溶素、抗體的細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域或經(jīng)由FTIR來實(shí)施。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述細(xì)菌成分的檢測經(jīng)由ELISA、酶活性、多位點(diǎn)酶電泳(MEE)或生物發(fā)光測定法來實(shí)施。
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