[發(fā)明專利]生產(chǎn)重組生物產(chǎn)品的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200780031874.1
• 申請日: 2007-08-03
• 公開（公告）號: CN101541972A
• 公開（公告）日: 2009-09-23
• 發(fā)明（設計）人: 帕克·加梅爾;尼奧·布魯恩;馬丁·科萊尼斯
• 申請（專利權）人: 都柏林城市大學
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N15/11;C12N5/10
• 代理公司: 北京中博世達專利商標代理有限公司
• 代理人: 申 健

1、一種生產(chǎn)重組生物產(chǎn)品的方法，該方法采用哺乳動物生產(chǎn)細胞培養(yǎng)物， 該方法包含下述步驟：修飾哺乳動物生產(chǎn)細胞培養(yǎng)物，以調控細胞培養(yǎng)物中至 少一種miRNA在生長周期中的水平。

2、一種生產(chǎn)重組生物產(chǎn)品的方法，該方法采用哺乳動物生產(chǎn)細胞培養(yǎng)物， 該方法包含下述步驟：

(a)在細胞培養(yǎng)初期開始時或過程中，制備哺乳動物生產(chǎn)細胞的生物量； 和

(b)一旦達到希望的哺乳動物生產(chǎn)細胞濃度，造成哺乳動物生產(chǎn)細胞內一 種或多種表1中的miRNA分子水平的增加。

3、如權利要求1或2所述的方法，其中用一種或多種表1中的miRNA分 子瞬時轉染所述哺乳動物生產(chǎn)細胞。

4、如權利要求3所述的方法，其中所述miRNA分子是合成的miRNA前 體分子。

5、如權利要求3或4所述的方法，其中使用脂質體遞送、電穿孔或磷酸鈣 介導所述轉染。

6、如權利要求1或2所述的方法，其中用在轉錄啟動子控制下的包含編碼 表1中的miRNA分子的核酸序列的表達載體瞬時轉染所述細胞。

7、如權利要求6所述的方法，其中所述核酸序列編碼表1中的miRNA分 子的前體。

8、如權利要求6或7所述的方法，其中所述轉錄啟動子是組成型或誘導型 啟動子。

9、如權利要求1或2所述的方法，其采用工程化成具有在誘導型啟動子控 制下穩(wěn)定整合到細胞基因組中的表1中的miRNA分子的編碼序列或其前體的 哺乳動物生產(chǎn)細胞，且其中該方法包含，在細胞周期的生長停滯期開始時或即 將開始之前，誘導miRNA分子的表達。

10、如權利要求9所述的方法，其中所述啟動子是溫度誘導型啟動子。

11、如任一項前述權利要求所述的方法，其中所述miRNA分子選自包含 hsa-miR-21和hsa-miR-24的組。

12、如權利要求1所述的方法，其包含下述步驟：在培養(yǎng)初期開始時或在 培養(yǎng)初期過程中，提高哺乳動物生產(chǎn)細胞內一種或多種表1中的miRNA分子 的抑制劑的水平。

13、如權利要求1所示的方法，其中所述至少一種miRNA是初始的、前 體、或成熟的表1中的miRNA。

14、如權利要求12所述的方法，其采用工程化成具有在誘導型啟動子控制 下穩(wěn)定整合到細胞基因組中的抑制劑編碼序列的哺乳動物生產(chǎn)細胞，且其中該 方法包含，在培養(yǎng)初期開始時或在培養(yǎng)初期過程中，誘導抑制分子的表達。

15、如權利要求14所示的方法，其中表達由表達誘導物的存在或表達阻抑 物的缺失來誘導。

16、如權利要求14或15所述的方法，其中一旦達到合適的細胞生物量， 就停止誘導miRNA抑制分子的表達。

17、如權利要求1所述的方法，其包含下述步驟：在培養(yǎng)初期開始時或在 培養(yǎng)初期過程中，提高細胞內一種或多種表1中的miRNA分子的抑制劑的水 平，隨后在細胞周期的生長停滯期之前或過程中，提高細胞內一種或多種表1 中的miRNA分子的水平。

18、如任一項前述權利要求所述的方法，其中所述細胞是中國倉鼠卵巢 (CHO)細胞。

19、如權利要求18所述的方法，其中所述CHO細胞是CHO-K1細胞或 CHO-DUKX細胞。

20、如權利要求2至19中任一項所述的方法，其中在比生長初期更低的培 養(yǎng)溫度進行生長停滯期。

21、如權利要求20所述的方法，其中在37℃進行生長初期。

22、如權利要求20或21所述的方法，其中在31℃進行生長停滯期。