[發(fā)明專(zhuān)利]生產(chǎn)重組生物產(chǎn)品的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200780031874.1
• 申請(qǐng)日: 2007-08-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101541972A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 帕克·加梅爾;尼奧·布魯恩;馬丁·科萊尼斯
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 都柏林城市大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/02
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/02;C12N15/11;C12N5/10
• 代理公司: 北京中博世達(dá)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 申 健

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及制備中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞培養(yǎng)物的方法，和使用CHO 細(xì)胞培養(yǎng)物生產(chǎn)重組生物藥物產(chǎn)品的方法。本發(fā)明也涉及重組CHO細(xì)胞系。

背景技術(shù)

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)是用于生產(chǎn)藥用重組蛋白質(zhì)的最廣泛使用的細(xì) 胞系，而且涉及CHO變體的方法占大量年收入(Andersen和Krummen，2002)。 盡管缺少完全測(cè)序的基因組，已經(jīng)使用非-CHO陣列(Baik等人，2006)或?qū)? 有的CHO?cDNA陣列(Wong等人，2006)進(jìn)行了許多重要的CHO轉(zhuǎn)錄特性 研究。這些研究已經(jīng)描述了在CHO培養(yǎng)過(guò)程中低溫和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的效應(yīng)。 類(lèi)似地，許多蛋白質(zhì)組學(xué)研究已經(jīng)研究了CHO的蛋白質(zhì)組和培養(yǎng)條件例如溫 度引起的蛋白質(zhì)表達(dá)的變化(Baik等人，2006；Champion等人，1999；VanDyk 等人2003；Kaufmann等人，1999；Lee等人，2003)。這些研究已經(jīng)增加了對(duì) CHO功能的調(diào)節(jié)的總體理解，特別是對(duì)于降溫效應(yīng)。

已經(jīng)證實(shí)，重組生產(chǎn)CHO細(xì)胞系的低溫培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致持續(xù)的生存力和增加 的比生產(chǎn)力(Al-Fageeh等人，2006；Fogolin等人，2004；Furukawa和Ohsuye， 1998；Kaufmann等人，1999)，同時(shí)維持產(chǎn)物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(Fogolin等人，2005； Yoon等人，2003b)。降低培養(yǎng)溫度的最明顯的結(jié)果是生長(zhǎng)速率的立即降低，其 它效應(yīng)包括降低的代謝(葡萄糖消耗，氧攝入，乳酸&銨生成)和增加的對(duì)剪 切力和細(xì)胞凋亡的抗性(Chuppa等人，1997；Furukawa和Ohsuye，1998；Moore 等人，1997；Yoon等人，2003a)。生長(zhǎng)速率的降低與在細(xì)胞周期的G1期的細(xì) 胞的積累有關(guān)(Hendrick等人，2001；Kaufmann等人，1999；Yoon等人，2003a， b)，并且，已經(jīng)將G1期停滯與增加的生產(chǎn)力相關(guān)聯(lián)(Fussenegger，2001)。

由于上面列出的原因，許多細(xì)胞培養(yǎng)方法采用雙階段培養(yǎng)，通過(guò)使細(xì)胞在 37℃生長(zhǎng)，以使生物量最大化，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)至低溫，以促進(jìn)蛋白質(zhì)生產(chǎn)，同 時(shí)維持更長(zhǎng)的且更有活力的靜止/生產(chǎn)期(Fogolin等人，2004，2005；Butler， 2005；Fox等人，2004)。兩種在變溫后誘導(dǎo)的最熟知的蛋白質(zhì)是冷誘導(dǎo)的RNA 結(jié)合蛋白質(zhì)(CRIP)和RMB3。其中，已知CRIP會(huì)在低溫條件下造成生長(zhǎng)停 滯(Danno等人，2000；Nishiyama等人，1997，Sonna等人，2002)。但是， 總體而言，關(guān)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞如何對(duì)低溫作出響應(yīng)知之甚少。

miRNAs是在翻譯水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)的小的(～22個(gè)核苷酸)非編碼的RNAs (ncRNAs)。每個(gè)miRNA表面上調(diào)節(jié)多個(gè)基因，預(yù)期在哺乳動(dòng)物中存在數(shù)百 個(gè)miRNA基因(Lim等人2003)。1993年在秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)(C.elegans)中發(fā) 現(xiàn)了第一個(gè)miRNA(Lee等人，1993)，近年來(lái)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，存在巨大數(shù)量的這 種分子(高達(dá)2％的人基因組編碼miRNAs(Miska，2005))。最近，已經(jīng)發(fā)現(xiàn) miRNAs對(duì)于發(fā)育(Ambros，2003；Chen等人，2004)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡 (Brennecke等人2003)、細(xì)胞凋亡和脂肪代謝(Xu等人2003)和細(xì)胞分化 (Chang等人2004)而言是至關(guān)重要的。

發(fā)明內(nèi)容