[發(fā)明專利]用于DNA擴(kuò)增反應(yīng)的溶液預(yù)處理

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200780015509.1
• 申請(qǐng)日: 2007-03-08
• 公開（公告）號(hào): CN101432443A
• 公開（公告）日: 2009-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 休·威廉·摩根;安德魯斯·瑞克特
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 懷卡托林克有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 北京高默克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 金 鳳

1.一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)之前處理溶液的方法，包括以下步驟：

(a)獲得一種堿溶液，所述堿溶液沒有用于擴(kuò)增反應(yīng)的模板DNA，

(b)將具有至少一種活性形式和至少一種惰性形式的結(jié)合劑與所述堿溶液混合，

(c)將來自(b)的混合物進(jìn)行外部刺激，所述刺激將結(jié)合劑從惰性形式轉(zhuǎn)化成活性形式， 導(dǎo)致結(jié)合劑結(jié)合到堿溶液中的任何污染性DNA上，從而使得污染性DNA為不起反應(yīng)性的， 且當(dāng)所述溶液隨后被用于DNA擴(kuò)增反應(yīng)中其間加入模版DNA時(shí)污染性DNA不被一起擴(kuò) 增，

(d)除去外部刺激，由此將結(jié)合劑從活性形式轉(zhuǎn)化成惰性形式。

2.一種制備用于DNA擴(kuò)增反應(yīng)的溶液的方法，包括以下步驟：

(a)獲得一種堿溶液，所述堿溶液沒有用于擴(kuò)增反應(yīng)的模板DNA，

(b)確定所述堿溶液中污染性外源性DNA的量，

(c)確定要結(jié)合所有污染性DNA所需的結(jié)合劑濃度，所述結(jié)合劑具有至少一種活性 形式和至少一種惰性形式，

(d)將具有至少一種活性形式和至少一種惰性形式的所需濃度的結(jié)合劑與所述堿溶液 混合，

(e)將來自(d)的混合物進(jìn)行外部刺激，所述刺激將結(jié)合劑從惰性形式轉(zhuǎn)化成活性 形式，并導(dǎo)致結(jié)合劑結(jié)合到堿溶液中的任何污染性DNA上，從而使得污染性DNA為不起 反應(yīng)性的，且當(dāng)所述溶液隨后被用于DNA擴(kuò)增反應(yīng)中期間加入模版DNA時(shí)污染性DNA 不被一起擴(kuò)增，

(f)除去外部刺激，由此將結(jié)合劑從活性形式轉(zhuǎn)化成惰性形式。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中所述堿溶液是蛋白質(zhì)溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1—3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述堿溶液是DNA聚合酶溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1—4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述堿溶液是Taq聚合酶溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述堿溶液是PCR主要混合物(master?mix)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中所述堿溶液是RNA制劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求1—7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述DNA擴(kuò)增反應(yīng)是PCR。

9.根據(jù)權(quán)利要求1—8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述刺激為可見光。

10.根據(jù)權(quán)利要求1—8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述刺激為紫外光。

11.根據(jù)權(quán)利要求1—10中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述結(jié)合劑是乙錠單疊氮化物。

12.根據(jù)權(quán)利要求11中所述的方法，其中所述乙錠單疊氮化物的濃度為1和5ug?mL^-1之間。

13.根據(jù)權(quán)利要求11中所述的方法，其中所述乙錠單疊氮化物的濃度約為3ug?mL^-1。

14.一種用于DNA擴(kuò)增反應(yīng)的溶液，其中所述溶液經(jīng)權(quán)利要求1—13中任一項(xiàng)的方法 制得。

15.一種DNA擴(kuò)增的方法，包括以下步驟：

(a)使用權(quán)利要求1—13中任一項(xiàng)的方法制備溶液，和，

(b)在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中使用來自(a)的溶液。

16.一種制備用于DNA擴(kuò)增反應(yīng)的溶液的方法，基本如本文中所附說明書和實(shí)施例所 述。

17.一種用于DNA擴(kuò)增反應(yīng)的溶液，基本如本文實(shí)驗(yàn)例部分1.6、1.7、2.1、2.2、2.3、 2.4和附圖所述。

18.一種DNA擴(kuò)增的方法，基本如本文實(shí)驗(yàn)例部分1.6、1.7、2.1、2.2、2.3、2.4和附 圖所述。