[發明專利]一種阿魏酸酯酶活性的檢測方法

無效

• 申請號: 200710304762.0
• 申請日: 2007-12-29
• 公開（公告）號: CN101216421A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發明（設計）人: 楊紅建;岳群
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12Q1/44;G06F19/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王朋飛

1.一種阿魏酸酯酶活性檢測方法，包括步驟：將待測酶液與阿魏酸甲酯溶液混合進行反應，檢測反應體系在反應起始及終止時的OD值，檢測酶空白反應體系在反應起始及終止時的OD值，并通過下述公式計算酶活：

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的待測酶液的制備步驟包括：在96孔的板上加入50～100μL適當稀釋6～1600倍的待測酶液，35～65℃預熱10～30分鐘。

3.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的待測酶液的制備步驟中在39℃預熱為15分鐘。

4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的阿魏酸甲酯溶液的制備步驟包括：稱取適量104.11mg阿魏酸甲酯，充分溶于20ml無水乙醇中，用100mM?MOPS緩沖液(pH4.5～7)稀釋至50～200μM，35～65℃預熱10～30分鐘。

5.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述的阿魏酸甲酯溶液的制備步驟中稀釋至100μM，pH為6.0，預熱為15分鐘。

6.如權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述的待測酶液與阿魏酸甲酯溶液的體積比為50～100∶100～200。

7.如權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述的待測酶液與阿魏酸甲酯溶液的體積比為100∶200。

8.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的反應溫度為35～65℃，時間為10～30分鐘。

9.如權利要求1-8任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述的所述的OD值是在340nm下用酶標儀檢測。

10.如權利要求1-9任一項所述的檢測方法，其特征在于，其包括如下步驟：

(1)稱取104.11mg阿魏酸甲酯，充分溶于20ml無水乙醇中，用100mM?MOPS緩沖液(pH4.5～7)稀釋至50～200μM，35～65℃預熱10～30分鐘，得到阿魏酸甲酯溶液；

(2)在96孔板上每孔加入適當稀釋6～1600倍的待測酶液，35～65℃預熱10～30分鐘，得待測酶液；

(3)在步驟(2)的待測酶液中，在48個孔中分別加入步驟(1)的阿魏酸甲酯溶液，35～65℃反應10～30分鐘，使用酶標儀在340nm檢測反應體系在反應起始及終止時的OD值；

在另外48個孔中分別加入100mM?MOPS緩沖液(pH6.0)替代阿魏酸甲酯溶液作為酶空白；

(4)通過如下公式計算阿魏酸酯酶的活性：

其中，待測酶液與阿魏酸甲酯溶液的體積比為50～100∶100～200。