[發(fā)明專利]一種腸道病毒的免疫熒光層析檢測試紙及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710304419.6
• 申請日: 2007-12-27
• 公開（公告）號: CN101187665A
• 公開（公告）日: 2008-05-28
• 發(fā)明（設計）人: 楊奇;周榮;王長兵;王海
• 申請（專利權）人: 北京博暉創(chuàng)新光電技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/52
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉長威

技術領域

本發(fā)明涉及一種免疫熒光層析檢測試紙，具體地說是一種用于檢測腸道常見病毒的免疫熒光層析檢測試紙條，可檢測的腸道病毒包括諾瓦克病毒、腸道腺病毒、星狀病毒和輪狀病毒，該試紙可用于流行病監(jiān)測、臨床檢驗等相關領域。

背景技術

免疫層析方法是以膠體金、熒光素、酶等作為標記物，利用特異性抗原抗體反應和標記物的特性，對抗原或抗體物質進行定位、定性乃至定量研究的標記技術。自Faulk與Taylor在1971年創(chuàng)立膠體金標記技術以來，Geoghegan_1應用免疫金技術檢測B淋巴細胞表面抗原，建立了光鏡水平的免疫金技術(IGS)。Danscher在此基礎上改進并發(fā)展了用銀顯影液增強光鏡金顆粒可見性的免疫金染色法(IGSS)。Holgate也對此法進行了改進。近年來，膠體金技術亦被引入免疫化學檢驗領域，稱為金標記免疫吸附試驗(gold?labeledimmunosorbent?assay，GLISA)。由于膠體金作為標記物時，其試紙條的操作簡便，不需要借助較復雜的監(jiān)測儀器等優(yōu)越性，因而在免疫組織化學檢測中受到了廣泛的重視和應用，但一般情況下其檢測靈敏度較低。以酶類(生物素酶、堿性磷酸酶等)作為標記物時，涉及加樣、溫浴、洗滌、顯色、終止等多個步驟，耗時較長，對操作人員和環(huán)境的要求較高；以熒光素作為標記物時，借助熒光檢測儀可以一定程度上提高檢測的靈敏度。

在免疫層析方法中，為進一步提高靈敏度，已有將熒光素作為標記物的報道。應用熒光素作為標記物，以熒光檢測儀作為檢測儀器，理論上可以提高其檢測的靈敏度。

腹瀉是人類尤其是兒童、老人及免疫缺陷者的一種常見病和多發(fā)病，其中病毒性腹瀉占70％～80％，是導致兒童死亡的重要原因。其中輪狀病毒(Rotavirus，RV)、星狀病毒(Astrovirus，AstV)、諾瓦克病毒(Norwalk?virus，NV)及腸道腺病毒(Enteric?Adenovirus，EAdV)等四種腸道病毒最為常見，3歲前幾乎所有兒童都經歷過上述腹瀉病毒的感染。

輪狀病毒引起的腹瀉是病毒性腹瀉的主要因素，40％-60％的腹瀉由輪狀病毒引起，全球每年約有1.4億人發(fā)生輪狀病毒腹瀉，其發(fā)病率和嚴重程度居秋冬季腹瀉的首位，并導致大約80萬兒童死亡，嚴重的輪狀病毒感染主要見于6～24個月嬰幼兒。腸道腺病毒也是病毒性腹瀉的重要病原，主要癥狀為腹瀉，水樣便或稀便，腹瀉次數(shù)較多，病程7～14天，排毒時間10～14天，可伴有發(fā)熱，嘔吐和呼吸道癥狀，病情相對較輕，少數(shù)也能導致嚴重脫水致死。星狀病毒與輪狀病毒相似，以2歲以下兒童多發(fā)，可以散發(fā)，也可以暴發(fā)流行。諾瓦克病毒分布廣泛，可導致成人和兒童的急性腹瀉的病毒，是除輪狀病毒外引起腹瀉的最主要的病毒病原，日本的流行病學調查顯示諾瓦克病毒感染率已超過輪狀病毒。在美國，成人非細菌性胃腸炎的爆發(fā)中有42％由該類病毒所引起，我國還缺乏流行病學調查。

目前臨床上仍無針對這四種腸道病毒的特效治療藥物，雖然有輪狀病毒疫苗研制的報道，但其效果還需要觀察，所以預防、控制病毒傳染顯得尤為重要。細菌、寄生蟲及食物中毒等原因也能引起腹瀉，臨床癥狀相仿，但與病毒性腹瀉的治療方案不一樣。有報道發(fā)現(xiàn)雙重病毒或多種病毒感染的腹瀉，其癥狀更嚴重，病情進展快，導致死亡的風險更高。

由于腸道傳染病的臨床表現(xiàn)和常用的輔助檢查缺乏明顯的特異性，因此存在著在疾病早期病原體診斷不明確的危險因素，從而存在著疾病早期濫用抗生素、生病期延長而增加患者痛苦和經濟負擔的客觀因素。因此，對此類疾病的深入研究，研制快速準確的診斷技術，對預防疾病的發(fā)生和減少死亡率，指導臨床對癥治療和避免抗生素濫用有重要意義。

應用高靈敏度的、快速和特異的免疫熒光層析方法進行腸道傳染病的病原學診斷，有利于在疾病癥狀出現(xiàn)的早期就確定引起腸道傳染病的病原體。有利于在疾病早期針對性進行有效的抗生素治療，縮短疾病的病程，減輕患者的痛苦和經濟負擔。對腸道病毒及時而準確的病原學診斷，有利于對腸道病毒的流行病學進行研究，指導在疾病流行的初期進行預防，從而能極大程度的降低腸道傳染病的流行范圍和程度，降低腸道傳染病對社會的危害。