[發(fā)明專利]連續(xù)酶膜反應(yīng)制備馬氏珠母貝降血壓肽的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710303512.5
• 申請(qǐng)日: 2007-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN101215594A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖丹葵;張政委;韋藤幼;童張法;周俊峰;孫建華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C12M1/12
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種活性多肽的制備方法，特別是連續(xù)酶膜反應(yīng)制備馬氏珠母貝降血壓肽的方法。

背景技術(shù)

功能食品被稱為二十一世紀(jì)的食品，其特有的功能就在于本身含有的活性成分對(duì)人體生理節(jié)律的調(diào)節(jié)，以達(dá)到預(yù)防或輔助治療疾病、促進(jìn)健康的目的。已確定的功能性食品基料中活性肽類已成為當(dāng)今具有活力的功能食品研究和加工的新領(lǐng)域。降血壓肽是一種重要的活性肽，由蛋白酶水解動(dòng)植物蛋白制備。不同的蛋白酶、蛋白質(zhì)及制備工藝，得到的降血壓肽數(shù)量與活性有較大的不同。《水產(chǎn)科學(xué)》2006年第3期158-160頁(yè)報(bào)道了利用水產(chǎn)蛋白質(zhì)開發(fā)酶解降血壓肽，發(fā)現(xiàn)從魚肉、蝦、蟹等水產(chǎn)動(dòng)物蛋白質(zhì)中制得的酶解降血壓肽其降壓活性優(yōu)于其它食物性蛋白質(zhì)。《食品與發(fā)酵工業(yè)》2006年第2期113-115頁(yè)報(bào)道了馬氏珠母貝肉ACEIP分離及提取的初步研究，用胃蛋白酶酶解馬氏珠母貝肉得到的馬氏珠母貝降血壓肽，采用間歇方法酶水解，然后滅酶、超濾及層析分離，得到的活性肽對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制活性指標(biāo)IC50為0.033mg/ml，但沒有報(bào)道降血壓肽的收率。

采用酶水解反應(yīng)與膜分離耦合的酶膜反應(yīng)器是提高活性肽收率的一種有效方法，因?yàn)榈鞍酌杆獾鞍踪|(zhì)的過程為不可逆過程，隨著水解過程的進(jìn)行，肽鏈不斷被切斷，最后的產(chǎn)物為氨基酸。所以想得到某種氨基酸組合的肽，除了要選擇合適的蛋白酶外，更重要的是及時(shí)把符合要求的肽通過膜從反應(yīng)體系中分離出去，從而避免被酶繼續(xù)分解，而分子較大的肽及蛋白酶留在反應(yīng)器內(nèi)繼續(xù)反應(yīng)，從而提高了產(chǎn)品收率及活性。《化學(xué)工程》2006年第4期43-46頁(yè)報(bào)道了酶解反應(yīng)與膜分離耦合連續(xù)制備酪蛋白磷酸肽，對(duì)間歇與連續(xù)酶解過程進(jìn)行了比較分析，證明反應(yīng)與分離耦合技術(shù)可使酶解效率及蛋白酶利用率大幅提高，但沒有報(bào)道利用酶膜反應(yīng)連續(xù)制備馬氏珠母貝降血壓肽的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種原料蛋白質(zhì)收率高、降血壓效果好的馬氏珠母貝降血壓肽的制備方法，其特征是采用堿性蛋白酶水解馬氏珠母貝肉和酶膜反應(yīng)器來制備馬氏珠母貝降血壓肽。

上述所說的堿性蛋白酶為地衣芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌所產(chǎn)生的蛋白酶。

上述所說的酶膜反應(yīng)器為把酶解過程放在膜分離裝置中實(shí)現(xiàn)的反應(yīng)器，該反應(yīng)器的膜組件的截留分子量為8-10KDa的管式陶瓷膜。

本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)步驟及條件如下：

把馬氏珠母貝肉粉碎制漿及加熱變性，用水稀釋到蛋白質(zhì)含量為2-5％，用NaOH調(diào)整pH值為9-10，得到反應(yīng)原料液；2、將反應(yīng)原料液連續(xù)加入酶膜反應(yīng)器，在操作溫度為35-60℃、壓力為0.3-0.5MPa、堿性蛋白酶濃度為0.2-2％下，同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)與分離，水解完成液連續(xù)透過膜流出酶膜反應(yīng)器；3、將水解完成液噴霧干燥，控制噴霧干燥的空氣進(jìn)口及出口溫度分別為170-190℃和90-110℃，即得蛋白質(zhì)水解收率為40～70％、IC50為0.3～0.6mg/ml的馬氏珠母貝肉降血壓肽產(chǎn)品。

本發(fā)明與已有的制備技術(shù)相比，其突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步是：

(1)產(chǎn)品收率高，生產(chǎn)成本低，適合規(guī)模生產(chǎn)。

(2)產(chǎn)品的IC50值，沒有經(jīng)過復(fù)雜的分離，已經(jīng)達(dá)到較低的數(shù)值，達(dá)到一般功能食品的要求。

(3)工藝簡(jiǎn)單，操作連續(xù)，投資少。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例一

把馬氏珠母貝肉粉碎制漿及加熱變性，用水稀釋到蛋白質(zhì)含量為3％，用NaOH調(diào)整pH值為9，得到反應(yīng)原料液；將反應(yīng)原料液連續(xù)加入截留分子量為8KDa的酶膜反應(yīng)器，在操作溫度為45℃、壓力為0.35MPa、地衣芽孢桿菌所產(chǎn)生蛋白酶的濃度為0.4％下，同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)與分離，水解完成液連續(xù)透過膜流出酶膜反應(yīng)器；將水解完成液噴霧干燥，控制噴霧干燥的空氣進(jìn)口及出口溫度分別為180℃和100℃，即得蛋白質(zhì)水解收率為40％、IC50為0.35mg/ml的馬氏珠母貝肉降血壓肽產(chǎn)品。

實(shí)施例二

把馬氏珠母貝肉粉碎制漿及加熱變性，用水稀釋到蛋白質(zhì)含量為4％，用NaOH調(diào)整pH值為10，得到反應(yīng)原料液；將反應(yīng)原料液連續(xù)加入截留分子量為10KDa的酶膜反應(yīng)器，在操作溫度為55℃、壓力為0.45MPa、枯草芽孢桿菌所產(chǎn)生蛋白酶的濃度為1％下，同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)與分離，水解完成液連續(xù)透過膜流出酶膜反應(yīng)器；將水解完成液噴霧干燥，控制噴霧干燥的空氣進(jìn)口及出口溫度分別為180℃和100℃，即得蛋白質(zhì)水解收率為50％、IC50為0.39mg/ml的馬氏珠母貝肉降血壓肽產(chǎn)品。

實(shí)施例三

把馬氏珠母貝肉粉碎制漿及加熱變性，用水稀釋到蛋白質(zhì)含量為4％，用NaOH調(diào)整pH值為10，得到反應(yīng)原料液；將反應(yīng)原料液連續(xù)加入截留分子量為10KDa的酶膜反應(yīng)器，在操作溫度為50℃、壓力為0.4MPa、地衣芽孢桿菌所產(chǎn)生蛋白酶的濃度為0.8％下，同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)與分離，水解完成液連續(xù)透過膜流出酶膜反應(yīng)器；將水解完成液噴霧干燥，控制噴霧干燥的空氣進(jìn)口及出口溫度分別為180℃和100℃，即得蛋白質(zhì)水解收率為50％、IC50為0.39mg/ml的馬氏珠母貝肉降血壓肽產(chǎn)品。