[發明專利]H5亞型禽流感病毒環介導等溫擴增檢測的試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 200710302588.6
• 申請日: 2007-12-27
• 公開（公告）號: CN101215610A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發明（設計）人: 焦新安;潘志明;耿士忠;張磊;陳祥;孫林;黃金林;殷月蘭
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務所
• 代理人: 江平

1.H5亞型禽流感病毒環介導等溫擴增檢測的試劑盒，其特征在于包括：

(1)反應液A：

含有10倍等溫反應緩沖液、濃度為8U/μl的禽類成髓細胞瘤病毒反轉錄酶、濃度為40U/μl的核酸酶抑制劑、濃度為8U/μl的Bst?DNA聚合酶、濃度為10mM的dNTP、濃度為100mM的硫酸鎂、濃度為20μM的內引物1、濃度為20μM的內引物2、濃度為10μM的外引物1、濃度為10μM的外引物2和濃度為5M的甜菜堿；

其中：

10倍等溫反應緩沖液含有濃度為200mM、pH值為8.8的三羥基甲基氨基甲烷鹽酸鹽、濃度為100mM的氯化鉀、濃度為100mM的硫酸銨、濃度為20mM的硫酸鎂和濃度為1％的曲拉通X-100；

內引物1為：TCTTTGTCTGCAGCGTAYCCTTTTGGGAATGGTAGATGGTTGG

內引物2為：ATGGAGTCACCAATAAGGTCAACTTTTTCTAAGTTRTTAAATTCCCTTCCAAC

外引物1為：TATAGAGGGRGGATGGCA

外引物2為：CCGTCTTCCATYTTYTTGTT

(2)反應液B：1000倍熒光染料。

2.根據權利要求1中所述H5亞型禽流感病毒環介導等溫擴增檢測的試劑盒，其特征在于反應液A由2.5μl10倍等溫反應緩沖液、1.0μl?AMV反轉錄酶、0.25μl核酸酶抑制劑、1.0μl?Bst?DNA聚合酶、1.5μl?dNTP、1.5μl硫酸鎂、2.0μl內引物1、2.0μl內引物2、0.5μl外引物1、0.5μl外引物2、5.0μl甜菜堿和5.25μl焦碳酸二乙酯處理水組成。

3.一種如權利要求1所述H5亞型禽流感病毒環介導等溫擴增檢測的試劑盒的應用，其特征在于：

將2μl待檢RNA溶液加入裝有反應液A的反應管中，放置于60～65℃恒溫水浴箱中，經90min后在上述反應管中再加入1μl反應液B，用肉眼觀察顏色變化，如顏色變為綠色，則樣品為H5亞型禽流感病毒；如果顏色為黃色，則待檢樣品不是H5亞型禽流感病毒。