[發(fā)明專利]齊考諾肽的固相合成方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710301598.8
• 申請日: 2007-12-26
• 公開（公告）號: CN101412752A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發(fā)明（設計）人: 路楊;李新宇
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州諾泰制藥技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/04
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司
• 代理人: 徐關(guān)壽

技術(shù)領域

本發(fā)明屬生物化學技術(shù)領域，具體涉及一種齊考諾肽的固相合成方法。

背景技術(shù)

齊考諾肽化學名：L-半胱酰胺-L-賴氨酰-L-甘氨酰-L-賴氨酰-L-甘氨酰-L-丙 氨酰-L-賴氨酰-L-半胱氨酰-L-絲氨酰-L-精氨酰-L-亮氨酰-L-蛋氨酰-L-酪氨酰-L- 天冬氨酰-L-半胱氨酰-L-半胱氨酰-L-蘇氨酰-L-甘氨酰-L-絲氨酰-L-半胱氨酰-L- 精氨酰-L-絲氨酰-L-甘氨酰-L-賴氨酰-L-半胱氨酰胺(1→16)(8→20)(15→25) 三環(huán)二硫化物。

化學結(jié)構(gòu)式為：

分子式：C₁₀₂H₁₇₂N₃₆O₃₂S₇

分子量：2639.13

齊考諾肽系從南太平洋海洋蝸牛Conus?magus提取的包含25個氨基酸、3 個二硫鍵肽類毒素合成物。可選擇性作用于樹突和軸突終末支N型電敏鈣通道， 從而抑制最初的傷害刺激傳入。一系列的臨床實驗已經(jīng)證明鞘內(nèi)注射齊考諾肽 可以治療帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛、幻肢痛、HIV相關(guān)神經(jīng)病理性疼痛、難治性癌 痛、手術(shù)后疼痛。其鞘內(nèi)注射較嗎啡更具潛力而不必擔心藥物的耐受及成癮性。

目前多對二硫鍵多肽的合成方法，一類是基于生物提取技術(shù)，另外一類是 使用單一的半胱氨酸保護基，脫除后再通過低溫下控制其在自然條件下反應組 構(gòu)成環(huán)。

生物提取受到現(xiàn)有有限生物資源的影響，提取過程較繁瑣，效率低，且比 較難得到高純度的產(chǎn)物；低溫自然成環(huán)反應屬于熱力學控制，環(huán)化過程慢，過 程控制較復雜，反應收率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種過程簡單、效率高、收率高的齊考諾肽的固相合成方 法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種齊考諾肽的固相合成方法，所述方法包括如下順序步驟：

(1)以Fmoc-Rink?Amide-MBHA樹脂為固相載體，進行程序反應，依次進 行縮合反應連接25個保護基氨基酸，得到25個氨基酸的線性肽全保護 樹脂；其中，形成二硫鍵的三組Cys(1→16、8→20、15→25)中，同 組的Cys同時連接Trt、Acm或Mob保護基中的一種，且不同組的Cys 所連接保護基各不相同；

(2)依次脫除3組Cys的保護基、并進行環(huán)化反應形成二硫環(huán)鍵，脫除側(cè) 鏈保護基團并切割樹脂，得到含有3個二硫環(huán)的齊考諾肽。

本發(fā)明針對多對二硫鍵多肽的特點，結(jié)合半胱氨酸側(cè)鏈巰基的化學反應特 性，通過使用多種的不同保護強度的巰基暫時性保護基，來依次脫除，依次成環(huán)， 這樣可以將環(huán)化過程由熱力學控制改為動力學控制方法，提高環(huán)化速度，反應效 率，并且得到較滿意的收率。所接入的其他氨基酸的保護基，可根據(jù)嘗試設計。

所述及的Fmoc-Rink?Amide-AM樹脂的化學結(jié)構(gòu)為：

可采用市售產(chǎn)品，如可采用天津南開和成科技公司生產(chǎn)的規(guī)格為：subst. 0.5mmol/g，DVB：1％，Mesh?100～200的Fmoc-Rink?Amide-AM樹脂。

具體的，所述方法包括如下順序步驟：