[發明專利]齊考諾肽的固相合成方法

有效

• 申請號: 200710301598.8
• 申請日: 2007-12-26
• 公開（公告）號: CN101412752A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 路楊;李新宇
• 申請（專利權）人: 杭州諾泰制藥技術有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/04
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司
• 代理人: 徐關壽

1.一種齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于所述方法包括如下順序步驟：

(1).以Fmoc-Rink?Amide-MBHA樹脂為固相載體，進行程序反應，依次 進行縮合反應連接以下氨基酸：Fmoc-Cys(Mob)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH， Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH， Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Acm)-OH， Fmoc-Cys(Mob)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Met-OH， Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH， Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH， Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Cys(Acm)-OH，得到 H₂N-Cys(Acm)-Lys(Boc)-Gly-Lys(Boc)-Gly-Ala-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Arg(P bf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Mob)-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Cys( Trt)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Cys(Mob)-NH-Rink?Amide-MBHA樹脂；程 序反應步驟如下：先用20％的哌啶/DMF溶液室溫處理脫去Fmoc-保護基；再加 入1～5當量的Fmoc-保護氨基酸、1～5當量的HOBt和1～5當量的N，N-二異丙基 碳二亞胺，攪拌，室溫反應2～5小時，連接Fmoc-保護氨基酸；所述HOBt用二 氯甲烷或二氯甲烷與N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解后加入；

(2).脫除Cys(Trt)的Trt保護基，進行第一次環化反應，得到一環肽樹脂， 脫除Trt保護基反應條件為：1％的TFA/DCM溶液中、室溫反應20分鐘；環化 反應條件為：水、乙腈、DMSO體積比15∶10∶1的混合溶液中，pH?8，室溫 反應4小時；

(3).脫除Cys(Acm)的Acm保護基、同時進行第二次環化反應，得到二環 肽樹脂，反應條件為：碘濃度為0.4mmol/ml的碘/甲醇溶液中，室溫反應1～2小 時；

(4).脫除Cys(Mob)的Mob保護基和剩余側鏈保護基，并切割樹脂，得到 二環肽；反應條件為：三氟醋酸、三氟甲磺酸、硫代苯甲醚、乙二硫醇體積比 80∶8∶8∶4的混合溶液中，室溫反應3小時；

(5).進行第三次環化反應，反應條件為：二環肽溶于水中，調pH?8，雙 氧水存在下，室溫反應1小時，反應結束后經C18填料的反相高效液相色譜柱 純化，洗脫、濃縮、干燥，得到所述齊考諾肽。

2.如權利要求1所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于所述程序反 應步驟如下：

①洗滌：用二氯甲烷和乙醇交替洗滌2～3次，二氯甲烷用量為5～7mL/g樹 脂，乙醇用量為5～7mL/g樹脂；

②脫保護基：用20％的哌啶/DMF溶液室溫下處理2～3次，每次20min，脫 去Fmoc-保護基；

③洗滌：用二氯甲烷和乙醇交替洗滌2～3次，二氯甲烷用量為5～7mL/g樹 脂，乙醇用量為5～7mL/g樹脂；

④連接保護基：加入1～5當量的Fmoc-保護氨基酸，1～5當量的HOBt，所 述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷與N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解，然后加 入1～5當量的N，N-二異丙基碳二亞胺，攪拌，室溫反應2～5小時；

⑤洗滌：用二氯甲烷和乙醇交替洗滌2～3次，二氯甲烷用量為5～7mL/g樹 脂，乙醇用量為5～7mL/g樹脂。