[發明專利]一種胸腺素β4的固相合成方法

無效

• 申請號: 200710301301.8
• 申請日: 2007-12-26
• 公開（公告）號: CN101412755A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 趙德中;李新宇
• 申請（專利權）人: 杭州諾泰制藥技術有限公司
• 主分類號: C07K14/66
• 分類號: C07K14/66;C07K14/47;C07K1/04
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司
• 代理人: 徐關壽

技術領域

本發明屬于生物化學技術領域，涉及一種胸腺素β4的固相合成方法。

背景技術

胸腺素β4化學名：N-乙酰基-絲氨酰-天冬氨酰-賴氨酰-脯氨酰-天冬氨酰-蛋氨酰-丙氨酰-谷氨酰-異亮氨酰-谷氨酰-賴氨酰-苯丙氨酰-天冬氨酰-賴氨酰-絲氨酰-賴氨酰-亮氨酰-賴氨酰-賴氨酰-蘇氨酰-谷氨酰-蘇氨酰-谷氨酰氨酰-谷氨酰-賴氨酰-天冬酰胺酰-脯氨酰-亮氨酰-脯氨酰-絲氨酰-賴氨酰-谷氨酰-蘇氨酰-異亮氨酰-谷氨酰-谷氨酰胺酰-谷氨酰-賴氨酰-谷氨酰胺酰-丙氨酰-甘氨酰-谷氨酰-絲氨酸。

肽的序列為：

Ac-Ser-Asp-Lys-Pro-Asp-Met-Ala-Glu-Ile-Glu-Lys-Phe-Asp-Lys-Ser-Lys-Leu-Lys-Lys-Thr-Glu-Thr-Gln-Glu-Lys-Asn-Pro-Leu-Pro-Ser-Lys-Glu-Thr-Ile-Glu-Gln-Glu-Lys-Gln-Ala-Gly-Glu-Ser-OH

分子式：C₂₁₂H₃₅₀N₅₆O₇₈S

分子量：4963.49

Thymosin-β4是肌動蛋白的隱蔽蛋白，作為肌動蛋白解聚和重聚的的動力原，調控肌動蛋白的動力學變化，影響一些蛋白分子的合成與表達。Thymosin-β4廣泛分布在胚乳動物包括神經系統在內的組織之中，在不同系統之中發揮不同的生物學作用，在神經系統生長發育和損傷過程中都有較高的表達，現研究發現：它可以參與突觸的形成、軸突生長、細胞的遷移、調節樹突野可塑性的變化等生物學過程。

1963年，R.B.Merrifield創立了將氨基酸的C末端固定在不溶性樹脂上，然后在此樹脂上依次縮合氨基酸，延長肽鏈、合成蛋白質的固相合成法。多肽的固相合成與液相合成相比優點在于(1)大大簡化了反應后處理操作：不溶性載體鍵合的聚合物只要簡單的反復過濾和洗滌，即可從可溶性的溶劑和副產物中分離出來，省時，省力；(2)可充分利用熱力學和動力學因素促進反應：可溶性試劑可以過量以使反應完全和獲得高產率，過量的試劑可簡單的用溶劑沖洗，過濾清除；(3)逐步合成更為簡化，因為所有的反應都可以在一個容器中進行，因而也避免了反應中間體轉移的手續和損失；(4)樹脂再生，如果選擇適當的鏈接分子和裂解條件，高分子樹脂可再生重復使用。但是對于大于30個氨基酸的長鏈肽來說，固相逐一連接氨基酸會遇到一些比較嚴重的問題，肽在達到一定的長度和條件后，會在固相樹脂載體上產生折疊或者片層等二級結構，肽鏈產生交聯或者聚合，使得活性氨基位點被深藏或包埋，從而增加了位阻，大大影響氨基酸的縮合率，另外逐一偶聯所需要的反應時間冗長，氨基酸消旋的幾率也相應極大的增加，從而使得產物中雜質多并且異常難以純化。

發明內容

本發明目的是提供一種反應時間短、縮合率高、易于純化、產物純度高的胸腺素β4的固相合成方法。

本發明采用的技術方案是：

一種胸腺素β4的固相合成方法，其特征在于所述方法為：(1)以所述胸腺素β4的肽鏈自N端連續切分得到的8～12個氨基酸長度的片段D、片段C、片段B、片段A作為固相分段合成目的片段，以王樹脂為固相載體，依次進行縮合反應連接保護氨基酸，得到A肽全保護樹脂；分別以2-chlorotrityl?chloride?resin為固相載體，依次進行縮合反應連接保護氨基酸，得到片段B肽全保護樹脂、片段C肽全保護樹脂和片段D肽全保護樹脂；(2)分別切割片段B肽全保護樹脂、片段C肽全保護樹脂和片段D肽全保護樹脂，得到片段B全保護肽、片段C全保護肽和片段D全保護肽；(3)依次將片段B全保護肽、片段C全保護肽和片段D全保護肽連接至A肽全保護樹脂，得到胸腺素β4的全保護肽樹脂；(4)用醋酸酐乙酰化胸腺素β4的全保護肽樹脂，用三氟乙酸切割樹脂，得到粗肽；(5)粗肽溶于5％醋酸水溶液，經C₁₈填料的反相高效液相色譜柱純化，洗脫、濃縮、干燥，得到所述胸腺素β4。

所述及的王樹脂化學結構為：

所述及的2-chlorotrityl?chloride?resin結構如下：