[發明專利]一種胸腺素β4的固相合成方法

無效

• 申請號: 200710301301.8
• 申請日: 2007-12-26
• 公開（公告）號: CN101412755A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 趙德中;李新宇
• 申請（專利權）人: 杭州諾泰制藥技術有限公司
• 主分類號: C07K14/66
• 分類號: C07K14/66;C07K14/47;C07K1/04
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司
• 代理人: 徐關壽

1、一種胸腺素β4的固相合成方法，其特征在于所述方法為：(1)以所述胸腺素β4的肽鏈自N端連續切分得到的8～12個氨基酸長度的片段D、片段C、片段B、片段A作為固相分段合成目的片段，以王樹脂為固相載體，依次進行縮合反應連接保護氨基酸，得到A肽全保護樹脂；分別以2-chlorotrityl?chlorideresin為固相載體，依次進行縮合反應連接保護氨基酸，得到片段B肽全保護樹脂、片段C肽全保護樹脂和片段D肽全保護樹脂；(2)分別切割片段B肽全保護樹脂、片段C肽全保護樹脂和片段D肽全保護樹脂，得到片段B全保護肽、片段C全保護肽和片段D全保護肽；(3)依次將片段B全保護肽、片段C全保護肽和片段D全保護肽連接至A肽全保護樹脂，得到胸腺素β4的全保護肽樹脂；(4)用醋酸酐乙酰化胸腺素β4的全保護肽樹脂，用三氟乙酸切割樹脂，得到粗肽；(5)粗肽溶于5％醋酸水溶液，經C₁₈填料的反相高效液相色譜柱純化，洗脫、濃縮、干燥，得到所述胸腺素β4。

2、如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法包括如下順序步驟：

(1).以王樹脂為固相載體，依次進行縮合反應連接如下保護氨基酸：Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，得到A肽全保護樹脂：Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gly-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-王樹脂；

(2).以2-chlorotrityl?chloride?resin為固相載體，依次進行縮合反應連接如下保護氨基酸：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，得到B肽全保護樹脂：Fmoc-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-2-chlorotrityl?chloride?resin全保護樹脂；

(3).以2-chlorotrityl?chloride?resin為固相載體，依次進行縮合反應連接如下保護氨基酸：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，得到C肽全保護樹脂：Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Glu(OtBu)-2-chlorotritylchloride?resin全保護樹脂；

(4).以2-chlorotrityl?chloride?resin為固相載體，依次進行縮合反應連接如下保護氨基酸：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，得到D肽全保護樹脂：

Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(OtBu)-Met-Ala-Glu(OtBu)-Ile-Glu(OtBu)-2-chlorotrityl?chloride?resin全保護樹脂；

(5).用三氟甲醇、二氯甲烷體積比1：4的混合溶液分別切割B肽全保護樹脂，C肽全保護樹脂和D肽全保護樹脂，分別得到片段B全保護肽：

Fmoc-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-OH，

片段C全保護肽：Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Glu(OtBu)-OH和片段D全保護肽：Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(OtBu)-Met-Ala-Glu(OtBu)-Ile-Glu(OtBu)-OH；

(6).以N，N-二異丙基碳二亞胺和1-羥基苯并三氮唑為肽合成縮合劑，依次將片段B全保護肽、片段C全保護肽、片段D全保護肽連接至A肽全保護樹脂上，得到胸腺素β4的全保護肽樹脂：Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(OtBu)-Met-Ala-Glu(OtBu)-Ile-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Phe-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gly-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-王樹脂；

(7).用醋酸酐于DMF溶液中乙酰化胸腺素β4的全保護肽樹脂，用三氟乙酸切割樹脂，得到粗肽；

(8).粗肽溶于5％醋酸水溶液，經C18填料的反相高效液相色譜柱純化，洗脫、濃縮、干燥，得到所述胸腺素β4。