[發(fā)明專利]一種白腐真菌及其選育方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710300037.6
• 申請日: 2007-12-24
• 公開（公告）號: CN101469312A
• 公開（公告）日: 2009-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 常東民;李市場;吳慧霞;茹群朵;左雪梅;王耀民;王娜;郭至瑞
• 申請（專利權(quán)）人: 河南仰韶生化工程有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N15/01;C12N13/00;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所（普通合伙）
• 代理人: 陳 浩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種白腐真菌(Trametes?Versicolor)YS-L613，同時還涉及該菌株的誘變選育方法，特別涉及利用該菌株生產(chǎn)漆酶的方法。

背景技術(shù)

漆酶是一種氧化還原酶，其作用主要是催化氧化還原反應(yīng)，因此漆酶能把分子氧直接還原為水，在沒有過氧化氫和其它次級代謝產(chǎn)物存在下，可催化大量的酚類和芳香胺類化合物的氧化。一些漆酶能高效地氧化抗壞血酸，另外一些真菌漆酶還能催化木質(zhì)素和甲氧基酚酸的脫甲基反應(yīng)。漆酶作用的底物相當(dāng)廣泛，包括多酚、甲基替代單酚、芳香胺、苯硫醇、聚甲氧基苯，以及其他容易氧化的化合物，還有許多與對二酚結(jié)構(gòu)類似的化合物，如氨基苯酚，鄰、對苯二酚，多酚，多胺，木質(zhì)素和芳基二胺等。由于具有相當(dāng)廣泛的底物專一性和較好的穩(wěn)定性，漆酶在廢水處理、生物漂白、芳香化合物轉(zhuǎn)化、環(huán)境監(jiān)測等方面具有重要應(yīng)用價值。漆酶的抑制劑大多是銅離子螯合劑，有鹵化物、半胱氨酸、EDTA和SDS等；離子強(qiáng)度的不同會影響酶的活力，不同來源的漆酶最適pH范圍也會不同。漆酶的應(yīng)用研究現(xiàn)主要集中于生物造紙、環(huán)境污染治理、食品工業(yè)應(yīng)用、有機(jī)合成、生物及免疫檢測等。對漆酶的研究早在上世紀(jì)60年代就己開始，已經(jīng)從不同來源的微生物中分離到大量的不同類型、不同功能的漆酶。漆酶制漿造紙工業(yè)、食品工業(yè)、能源工業(yè)中都顯示出廣闊的應(yīng)用前景。

漆酶是以農(nóng)副產(chǎn)品為原料，經(jīng)微生物純種發(fā)酵提取而制得的一種新型酶制劑。漆酶也是繼纖維素酶，木聚糖酶等新品種酶制劑開發(fā)之后的又一重要品種，是國家大力提倡發(fā)展的新型酶制劑產(chǎn)品之一。隨著國民經(jīng)濟(jì)的持續(xù)健康發(fā)展，人民的生活水平的逐步提高對漆酶的需求越來越大，這是社會發(fā)展的需要，也是開展該項目研究的重要意義之一。第二，從目前國內(nèi)酶制劑行業(yè)發(fā)展情況來看，漆酶研究雖起步較早，但發(fā)展緩慢。因此適時開發(fā)漆酶即可以提高競爭，有可以部分取代進(jìn)口產(chǎn)品，滿足國內(nèi)市場需求。第三，該項目的研究開發(fā)對于調(diào)整工業(yè)生產(chǎn)結(jié)構(gòu)具有重要作用。第四，發(fā)展漆酶的開發(fā)研制，不但可以滿足國內(nèi)市場的需求，而且可以出口國外，為國家創(chuàng)造大量的外匯，同時可以與纖維素酶、木聚糖酶、淀粉酶、糖化酶、果膠酶等配制成符合酶制劑，以滿足不同行業(yè)的要求。目前如何獲得大批量、低成本、高品質(zhì)的漆酶已經(jīng)成為制約和影響我國漆酶產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的關(guān)鍵因素。而解決這個問題需要從兩方面著手：菌種的選育及發(fā)酵工藝的優(yōu)化。

目前，國內(nèi)漆酶的研究大多還處在實驗室階段研發(fā)階段，沒有進(jìn)入工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)，其根本的原因在于：一是菌種的產(chǎn)酶水平較低，經(jīng)濟(jì)效益差，無法進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)；二是菌種規(guī)模生產(chǎn)的工藝不成熟。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種白腐真菌(Trametes?Versicolor)YS-L613。

同時，本發(fā)明的目的還在于提供一種白腐真菌(Trametes?Versicolor)YS-L613的誘變選育方法。

另外，本發(fā)明的目的還在于提供一種利用白腐真菌(TrametesVersicolor)YS-L613生產(chǎn)漆酶的方法，以大大提高漆酶的產(chǎn)率。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一種白腐真菌(TrametesVersicolor)YS-L613，其由以下方法誘變選育而制得，以白腐真菌為出發(fā)菌株，采用以UV、⁶⁰CO、紫外線、亞硝基胍、離子注入與微波處理相結(jié)合的復(fù)合誘變育種技術(shù)，選育出漆酶高產(chǎn)菌株YS-L613。

同時，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一種白腐真菌(Trametes?Versicolor)YS-L613的誘變選育方法，以白腐真菌為出發(fā)菌株，采用以UV、⁶⁰CO、紫外線、亞硝基胍、離子注入與微波處理相結(jié)合的復(fù)合誘變育種技術(shù)，選育出漆酶高產(chǎn)菌株YS-L613。

具體方法包括以下步驟：

(1)出發(fā)菌種，以白腐真菌YS菌株為出發(fā)菌種，4℃保藏于CPDA斜面；