[發明專利]一種基因免疫制備人類Ⅰ型胸苷激酶單克隆抗體的新方法無效
| 申請號： | 200710203299.0 | 申請日： | 2007-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN101186922A | 公開（公告）日： | 2008-05-28 |
| 發明（設計）人： | 丁克祥;鄭永晨;劉衛國;費定宇;丁宇 | 申請（專利權）人： | 丁克祥 |
| 主分類號： | C12N15/54 | 分類號： | C12N15/54;C12N15/79;C12N5/18;C07K16/40;G01N33/577 |
| 代理公司： | 岳陽市科明專利事務所 | 代理人： | 彭乃恩 |
| 地址： | 510515廣東省廣州市白云區同和廣州*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因 免疫 制備 人類 型胸苷 激酶 單克隆抗體 新方法 | ||
1.一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于：
將氨基喋呤處理的Hela細胞RNA作為原始模板，其中RNA經逆轉錄PCR獲得TK1?cDNA，其中TK1基因序列是用TK1?TA克隆雙向測序獲得。
2.根據權利要求1所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的TK1基因是通過HindIII和XhoI雙酶切獲得。
3.根據權利要求1所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的TK1基因通過定向連接入真核分泌型載體pSecTag2/HygroB。
4.根據權利要求3所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的定向連接位點是HindIII和XhoI之間。
5.根據權利要求1所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的重組質粒作為基因免疫制備TK1抗體的基因。
6.根據權利要求5所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的基因免疫是將重組質粒DNA注入小鼠股四頭肌。
7.根據權利要求6所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的注入的重組質粒在小鼠肌細胞中產生TK1蛋白。
8.根據權利要求7所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的TK1蛋白是可以分泌到細胞外，并作為免疫原。
9.根據權利要求8所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的免疫原是TK1蛋白分子的天然結構。
10.根據權利要求1所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的TK1基因免疫的小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合制成雜交瘤。
11.根據權利要求10所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的雜交瘤用重組原核表達的TK1篩選。
12.根據權利要求11所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的產生TK1抗體的雜交瘤細胞于小鼠腹腔內大量制備抗體。
13.根據權利要求12所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的單克隆抗體用蛋白G柱純化。
14.根據權利要求13所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的純化的單克隆抗體可以標記辣根過氧化物酶或熒光素。
15.根據權利要求13或14所述的一種基因免疫制備人類I型胸苷激酶單克隆抗體的新方法，其特征在于所述的抗體應用于檢測體液中的TK1。
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