[發(fā)明專利]杏丹注射劑的質(zhì)量控制方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710201880.9
• 申請(qǐng)日: 2006-01-24
• 公開（公告）號(hào): CN101156893A
• 公開（公告）日: 2008-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于文勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴陽(yáng)云巖西創(chuàng)藥物科技開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): A61K36/537
• 分類號(hào): A61K36/537;A61P9/10;A61P9/12;G01N30/02;G01N30/90
• 代理公司: 貴陽(yáng)中新專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 郭防

1.一種杏丹注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于：該方法包括以下全部或部分內(nèi)容：

銀杏葉藥材、銀杏葉提取物、銀杏葉總黃酮醇苷、銀杏葉總萜類內(nèi)酯、槲皮素、山奈素、異鼠李素、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、丹參藥材、丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽、丹參酮IIA中全部或部分成分的鑒別測(cè)試方法。

2.按照權(quán)利要求1所述的杏丹注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于：

所述注射劑的鑒別方法包括以下全部或部分內(nèi)容：

a、注射劑中丹參藥材、丹參酮IIA中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，用乙醚或石油醚或二氯甲烷或三氯甲烷或醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴セ蛉燃淄榛蚨燃淄槿芙猓鳛楣┰嚻啡芤海涣砣〉?duì)照藥材，丹參酮IIA對(duì)照品中的一種或兩種，制備對(duì)照溶液；丹參對(duì)照藥材溶液的制備：取丹參對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備：取丹參酮IIA對(duì)照品，加醋酸乙酯或甲醇或乙醇溶解并稀釋至合適濃度，作為對(duì)照品溶液；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷2～40∶0.2～5為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品中一種或兩種的色譜相應(yīng)位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；

b、注射劑中丹參酮IIA的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇或流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液20～90∶80～10為流動(dòng)相，流速為0.5～2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；

c、注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加甲醇或乙醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取，濾過，濾液濃縮，作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對(duì)照品的醋酸乙酯或10％～無(wú)水甲醇或10％～無(wú)水乙醇溶液為對(duì)照；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或二甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷醋酸乙酯或甲酸乙酯甲醇或乙醇或丙酮甲酸或乙酸0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm或日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；

d、注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對(duì)照品的水或10％～無(wú)水甲醇或10％～無(wú)水乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇乙腈水或0.2％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.2％～5％甲酸水溶液10～50∶2～30∶93～20為流動(dòng)相，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；

e、注射劑中丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛中一種或兩種的薄層色色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛對(duì)照品中一種或兩種的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或甲酸乙酯丙酮或甲醇或乙醇甲酸或冰醋酸1～25∶0.2～5∶0.2～5或苯或甲苯或二甲苯醋酸乙酯或甲酸乙酯甲酸或冰醋酸2～25∶1～22∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm或日光下檢視或噴以三氯化鐵與鐵氰化鉀的混合溶液后日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；

f、注射劑中丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛中一種或兩種的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛中一種或兩種對(duì)照品的水或甲醇或乙醇溶液為對(duì)照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5～40∶95～60為流動(dòng)相，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；

g、注射劑中銀杏葉提取物的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状蓟蛞掖既芙猓鳛楣┰嚻啡芤海涣砣°y杏葉對(duì)照提取物，同法制成對(duì)照提取物溶液；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜或以含0.1％～8％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-丁酮或丙酮-甲醇或乙醇-水1～20∶0.5～10∶0.1～5∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5％～10％三氯化鋁乙醇溶液，分別置日光及紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照提取物相應(yīng)的位置上，日光下應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外燈下應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

h、注射劑中黃酮醇苷類成分的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加甲醇-5％～35％鹽酸或乙醇-5％～35％鹽酸的混合溶液，加熱回流10分鐘～120分鐘，迅速冷卻至室溫，用甲醇或乙醇稀釋至合適濃度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取槲皮素、山奈素、異鼠李素對(duì)照品中的一種或幾種，分別或和并加甲醇或乙醇溶解并稀釋至合適濃度；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液20～80∶80～20為流動(dòng)相，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。

i、注射劑中萜類內(nèi)酯類成分的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加水溶解，加0.2％～30％鹽酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷萃取，合并萃取液，用0.5％～20％醋酸鈉溶液洗滌，分取醋酸鈉液，用醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷洗滌，合并醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取液及洗液，用水洗滌，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷洗滌，合并醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷液，回收醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷至干，殘?jiān)颖蚣状蓟蛞掖际谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤海涣戆坠麅?nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品中的一種或幾種，分別或合并加甲醇或乙醇制成每1ml含0.2mg～5mg的溶液；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和白果內(nèi)酯對(duì)照品溶液、銀杏內(nèi)酯A對(duì)照品溶液、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品溶液、銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品溶液的一種或幾種的混合對(duì)照品溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或以含0.1％～8％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯或甲苯醋酸乙酯或甲酸乙酯丙酮或丁酮甲醇或乙醇1～30∶0.5～15∶0.5～15∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸后在80℃～180℃加熱5～60分鐘，取出，放冷，置日光或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；

j、注射劑中萜類內(nèi)酯類成分的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加水溶解后加0.2～30％鹽酸溶液，用醋酸乙酯或正丁醇振搖提取，合并提取液，用0.5％～20％醋酸鈉溶液洗滌，分取醋酸鈉液，用醋酸乙酯或正丁醇洗滌。合并醋酸乙酯或正丁醇提取液及洗液，用水洗滌，合并水洗液，用醋酸乙酯或正丁醇洗滌，合并醋酸乙酯或正丁醇液，回收醋酸乙酯或正丁醇至干，殘?jiān)颖蚣状蓟蛞掖际谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤海灰园坠麅?nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-四氫呋喃-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液10～50∶5～20∶85～30為流動(dòng)相，流速為0.5～2.0ml/min，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。

3.按照權(quán)利要求2所述的杏丹注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于：

所述注射劑的鑒別方法包括以下全部或部分內(nèi)容：

a、注射劑中丹參藥材、丹參酮IIA的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙猓鳛楣┰嚻啡芤海涣砣〉?duì)照藥材，丹參酮IIA對(duì)照品中的一種或兩種，制備對(duì)照溶液；丹參對(duì)照藥材溶液的制備：取丹參對(duì)照藥材，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙猓鳛閷?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備：取丹參酮IIA對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯19∶1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品中一種或兩種的色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

b、注射劑中丹參酮IIA的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇1％冰醋酸水溶液75∶25為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，柱溫為30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；

c、注射劑中丹酚酸B的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加75％甲醇溶液溶解，作為供試品溶液；以丹酚酸B對(duì)照品的75％甲醇溶液為對(duì)照；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲烷醋酸乙酯甲醇甲酸2∶3∶4∶0.5∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

d、注射劑中丹酚酸B的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B對(duì)照品的75％甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，柱溫25℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；

e、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取丹參素鈉和原兒茶醛對(duì)照品中的一種或兩種，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以苯醋酸乙酯甲酸8∶7∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新鮮配制的2％三氯化鐵與1％鐵氰化鉀等體積的混合液，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

f、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對(duì)照品的水溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇1％冰醋酸水溶液13∶87為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫30℃，供試品色譜中，與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；

g、注射劑中銀杏葉提取物的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加正丁醇提取，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤海涣砣°y杏葉對(duì)照提取物，同法制成對(duì)照提取物溶液；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一含4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水5∶3∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈365nm檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照提取物相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

h、注射劑中黃酮醇苷類成分的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加甲醇-25％鹽酸＝4∶1的混合溶液，加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，用甲醇稀釋至合適濃度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以槲皮素、山奈素、異鼠李素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，55∶45甲醇-0.4％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。

i、注射劑中萜類內(nèi)酯類成分的薄層色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加水溶解，加2％鹽酸溶液2滴，用醋酸乙酯振搖提取4次，每次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸鈉溶液20ml洗滌，分取醋酸鈉液，用醋酸乙酯10ml洗滌。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗滌，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，殘?jiān)蛹状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤海灰园坠麅?nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照；采用薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各15μl，分別點(diǎn)于同一以含4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯醋酸乙酯丙酮甲醇10∶5∶5∶0.6為展開劑，10℃以下展開，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏蒸15分鐘，在140℃～160℃加熱30分鐘，取出，放冷，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；

j、注射劑中萜類內(nèi)酯類成分的液相色譜鑒別方法：

取待測(cè)杏丹注射制劑適量，加水溶解后加2％鹽酸溶液2滴，用醋酸乙酯振搖提取4次15ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸鈉溶液20ml洗滌，分取醋酸鈉液，用醋酸乙酯10ml洗滌。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次10ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗滌，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，殘?jiān)蛹状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤海灰园坠麅?nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，25∶10∶65甲醇-四氫呋喃-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。