[發(fā)明專利]一種麻瘋樹種子油體蛋白質(zhì)分離方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710195003.5
• 申請日: 2007-12-10
• 公開（公告）號: CN101343312A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈世華;劉玉君;茍平
• 申請（專利權(quán)）人: 云南神宇新能源有限公司
• 主分類號: C07K1/26
• 分類號: C07K1/26;C07K4/10
• 代理公司: 北京市廣友專利事務(wù)所有限責(zé)任公司
• 代理人: 宮建華

1.一種麻瘋樹種子油體蛋白質(zhì)分離方法，其特征在于采用蛋白質(zhì)雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行分離；包括第一向等電聚焦電泳步驟、膠條平衡步驟和第二向SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳步驟；所述的第一向等電聚焦電泳步驟為采用IPG預(yù)制膠條，分為兩段拼接，中酸性端pH4-7，長度9-12cm，中堿性端pH6-11，長度9-12cm，將預(yù)制膠條浸泡在180-250微升含有0.5-1.0毫克蛋白質(zhì)樣品中，12小時后取出進(jìn)行電泳，電泳條件為20℃恒溫，先分別在300V、600V和1000V電壓下電泳0.6-1.5小時，再在8000V電壓下電泳5-7小時；所述的膠條平衡步驟為等電聚焦完成后，取出膠條，在含1.0％二硫蘇糖醇、6.0M尿素、30％w/v甘油、2.5％w/v十二烷基硫酸鈉、50mM?Tris-HCl和余量去離子水，pH8.6的平衡緩沖液中平衡15分鐘后，再轉(zhuǎn)入2.5％碘乙酰胺上述平衡緩沖液中平衡15分鐘；所述的第二向SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳步驟為配制聚丙烯酰胺分別為15-20％分離膠和3-6％濃縮膠的垂直板膠，將平衡好的膠條轉(zhuǎn)移到垂直板膠的上端，用1％的瓊脂糖密封，置于電泳槽上，加滿含0.2-0.5％Tris、1.00-1.6％甘氨酸、0.05-0.1％SDS的電極緩沖液，在電流為30mA的條件下電泳2.5-4小時。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麻瘋樹種子油體蛋白質(zhì)分離方法，其特征在于所述的第一向等電聚焦電泳步驟為采用IPG預(yù)制膠條，分為兩段拼接，中酸性端pH4-7，長度11cm，中堿性端pH6-11，長度11cm，將預(yù)制膠條浸泡在200微升含有0.5-1.0毫克蛋白質(zhì)樣品中，12小時后取出進(jìn)行電泳，電泳條件為20℃恒溫，先分別在300V、600V和1000V電壓下電泳1.0小時，再在8000V電壓下電泳6小時。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麻瘋樹種子油體蛋白質(zhì)分離方法，其特征在于所述的第二向SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳步驟為配制聚丙烯酰胺分別為17％分離膠和4％濃縮膠的垂直板膠，將平衡好的膠條轉(zhuǎn)移到垂直板膠的上端，用1％的瓊脂糖密封，置于電泳槽上，加滿含0.3％Tris、1.44％甘氨酸、0.1％SDS的電極緩沖液，在電流為30mA的條件下電泳約3小時。