[發(fā)明專利]5’-核苷酸酶診斷試劑盒及5’-核苷酸酶活性濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710191493.1
• 申請日: 2007-12-19
• 公開（公告）號: CN101464291A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12Q1/68;C12Q1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的5’-核苷酸酶活性濃度測定方法，其方法原理如下：

核苷單磷酸+水?5核苷酸酶?核苷+磷酸根

磷酸根+草酰乙酸?磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶

??????????????二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸+水

二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型輔酶?丙酮酸脫氫酶

??????????????????????????丙酮酸+輔酶A+輔酶

核苷單磷酸可以是：腺苷單磷酸、肌苷單磷酸、尿苷單磷酸等

將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，測算出5’-核苷酸酶的活性濃度大小結(jié)果。

2.一種5’-核苷酸酶診斷試劑盒，主要成分包括：

緩沖液??????????????????????20——500mmol/L

穩(wěn)定劑??????????????????????1——4000mmol/L

還原型輔酶??????????????????0.1——0.35mmol/L

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶??????1000——80000U/L

丙酮酸脫氫酶????????????????1000——80000U/L

核苷單磷酸??????????????????1——50mmol/L

草酰乙酸????????????????????1——50mmol/L

乙酰輔酶A???????????????????1——50mmol/L

試劑成分的濃度不一定只限于上述范圍；在此范圍內(nèi)效果較好，在此范圍外，試劑仍會反應(yīng)作用。

其特征在于：試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述5’-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脫氫酶、核苷單磷酸、草酰乙酸、乙酰輔酶A組成單劑試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述5’-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脫氫酶、核苷單磷酸、草酰乙酸、乙酰輔酶A組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、核苷單磷酸、草酰乙酸、乙酰輔酶A組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定劑、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脫氫酶組成。還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脫氫酶、核苷單磷酸、草酰乙酸、乙酰輔酶A在試劑1或試劑2中的位置可以不限。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述5’-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脫氫酶、核苷單磷酸、草酰乙酸、乙酰輔酶A組成多劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、核苷單磷酸、草酰乙酸、乙酰輔酶A組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定劑、丙酮酸脫氫酶組成；試劑3，由緩沖液、穩(wěn)定劑、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶組成。還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脫氫酶、核苷單磷酸、草酰乙酸、乙酰輔酶A在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述5’-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于：還包括穩(wěn)定劑1—4000mmol/L或0.1％-100％體積比。所述穩(wěn)定劑為：硫酸銨(Ammonia?Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(PropyleneGlycol)、乙二醇(Ethylene?glycol)及防腐劑中的至少一種。