[發明專利]二粒小麥LRR-受體蛋白激酶基因、該基因的克隆方法及其應用

無效

• 申請號: 200710189711.8
• 申請日: 2007-10-10
• 公開（公告）號: CN101407814A
• 公開（公告）日: 2009-04-15
• 發明（設計）人: 牛吉山;劉瑞;鄭磊
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/12;C12N15/82
• 代理公司: 鄭州中原專利事務所有限公司
• 代理人: 張 春

技術領域

本發明涉及植物基因工程技術領域。具體涉及一種全長cDNA的分離、克隆及其應用。

背景技術

蛋白激酶家族是酶中的大家族，參與信號傳導途徑并在調節細胞功能中起重要作用，其中很多成員介導真核細胞對外界刺激的應答反應。類受體蛋白激酶(receptor-like?proteinkinases，RLKs)屬于蛋白激酶的一個亞家族，其結構包含胞外結構域(extracellulardomain)、單次跨膜域(signle-pass?transmembran?domain)和胞內激酶域(cytoplasmicprotein?kinase?domain)，它們通過胞外結構域與胞外信號分子，如離子、小分子或多肽等的特異結合來激活胞內激酶域的自磷酸化和互磷酸化活性，完成跨膜傳遞信號的功能。因為這類蛋白激酶的分子結構和功能酷似動物中發現的受體蛋白激酶(receptor?protein?kinase，RPK)(Hanks等1988；Yarden和Ullrich?1988；Ullrich和Schlessinger?1990)，但對其中的絕大多數尚未鑒定出其配基，故稱之為類受體蛋白激酶(Stone和Walker?1995)。依胞外結構域的類型，RLK可分為S-結構域(S-domain)型、類表皮生長因子(epidermal?growthfactor-like)型、類腫瘤壞死因子受體(tumor?necrosis?factor?receptorlike)型、富含亮氨酸重復序列(leucine-rich?repeat，LRR)型。目前，在植物中已鑒定的類受體激酶絕大多數屬于LRR型。

在小麥(Triticum?aestivum)高分子量麥谷蛋白基因位點附近有一個編碼LRR-類受體蛋白激酶的基因位點(標記為TaXa)，編碼蛋白與水稻(Oryza?sativa)抗病蛋白Xa21類似。通過反轉錄PCR途徑，從二粒小麥(Triticum?turgidum)的TaXa同源位點分離了3個cDNA克隆，ZS860(GenBank查詢號：EF394367)，ZS2000(GenBank查詢號：EF394368)和ZS2001(GenBank查詢號：EF394369)。一個完整的TaXa蛋白包括N-端保守區、LRR結構域、一個跨膜區和位于C-端的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶功能域。在基因進化過程中，由于堿基代換、缺失和插入導致了開放讀碼框的改變，使該位點基因的編碼多肽縮短。TaXa位點的祖先基因可能編碼1028個氨基酸組成的多肽，但到目前為止，還未見從普通小麥中分離到編碼約1028個氨基酸的完整、全長基因cDNA克隆的報告，限制了對這一同源位點基因功能的進一步研究。本發明成功分離到1個TaXa位點基因的全長cDNA克隆，編碼1026個氨基酸組成的多肽，構建了植物表達載體，這些將推動小麥屬TaXa基因功能的研究和利用。

發明內容

發明目的

本發明成功分離到1個TaXa位點基因的全長cDNA克隆，編碼1026個氨基酸組成的多肽，構建了植物表達載體，將推動小麥屬TaXa基因功能的研究和利用。

本發明的技術方案是：

一種二粒小麥LRR-受體蛋白激酶基因，其特征是：TtLRR-ST基因的全長cDNA序列，其核苷酸序列的堿基組成：