[發(fā)明專利]建立巴西橡膠樹(shù)懸浮細(xì)胞系的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710184891.0
• 申請(qǐng)日: 2007-10-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101173245A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華玉偉;黃華孫;黃天帶;吳紫云;曾霞;胡彥師;李維國(guó);李哲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/02
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/02;C12N5/04
• 代理公司: 海口翔翔專利事務(wù)有限公司
• 代理人: 莫臻

1.一種建立巴西橡膠樹(shù)懸浮細(xì)胞系的方法，其特征在于：包括外植體的準(zhǔn)備過(guò)程、胚性愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程、胚性愈傷組織繼代過(guò)程、胚性愈傷組織懸浮培養(yǎng)過(guò)程；

1)、所述外植體的準(zhǔn)備過(guò)程是以巴西橡膠樹(shù)花蕾為外植體，用70-80％酒精對(duì)花蕾進(jìn)行表面消毒30～60秒后，再用0.1％氯化汞消毒10～15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗3～6次，每次3～5分鐘；

2)、所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程是剝出消毒好的花蕾中的雄蕊，接種到誘導(dǎo)愈傷的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上于25～28℃的溫度進(jìn)行暗培養(yǎng)，培養(yǎng)40～60天；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，將MS培養(yǎng)基中的磷酸二氫鉀、無(wú)水氯化鈣、四水硫酸錳和七水硫酸鎂的含量調(diào)整為磷酸二氫鉀350-500mg/L、無(wú)水氯化鈣150-400mg/L、四水硫酸錳10-40mg/L、七水硫酸鎂400-600mg/L，并添加2，4-D0.5～3mg/L、KT?0.5～3mg/L、NAA?0.5～3mg/L、Phytagel?2～3g/L、蔗糖50～90g/L、椰子水40-60ml/L；

3)、所述胚性愈傷組織繼代過(guò)程是將經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)的胚性愈傷組織在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)2～4次，每7～10天一次，暗培養(yǎng)，溫度為25～28℃；

4)、所述胚性愈傷組織懸浮培養(yǎng)過(guò)程是將繼代后的愈傷組織破碎成0.2～0.5cm顆粒，然后將2～6g愈傷組織顆粒接種到含20～60ml液體培養(yǎng)基的三角瓶中，置于90～110r/分鐘的搖床上，在溫度為25～28℃，暗培養(yǎng)，每7～10天繼代一次，繼代3～8次后，將大塊的愈傷組織去掉，將小的愈傷和細(xì)胞繼續(xù)繼代培養(yǎng)，即獲得懸浮細(xì)胞系；所述液體培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，將MS培養(yǎng)基中的磷酸二氫鉀、無(wú)水氯化鈣、四水硫酸錳和七水硫酸鎂的含量調(diào)整為磷酸二氫鉀350-500mg/L、無(wú)水氯化鈣150-400mg/L、四水硫酸錳10-40mg/L、七水硫酸鎂400-600mg/L，并添加2，4-D?0.5～3mg/L、KT0.5～3mg/L、NAA?0.5～3mg/L、蔗糖50～90g/L、椰子水40-60ml/L。