[發明專利]改進G/11家族木聚糖酶的穩定性并且擴展其pH范圍的方法

無效

• 申請號: 200710180167.0
• 申請日: 2000-10-12
• 公開（公告）號: CN101173262A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 弗雷德·費內爾;奧西·特魯南;馬蒂·萊索拉
• 申請（專利權）人: 金內克國際公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 張紅春;封新琴

1.一種經過修飾的G/11家族的木聚糖酶，與對應的野生型木聚糖酶相比，其熱穩定性和pH值穩定性已提高，其中對所述野生型酶經過如下修飾：

-通過二硫橋將該酶的N-末端區與該蛋白的主體相連，和/或

-通過鹽橋將該酶的C-末端區與該蛋白的主體相連，或

-通過二硫橋將該酶的α-螺旋與該蛋白的主體相連，或

-使該蛋白中單個氨基酸突變。

2.權利要求1的經過修飾的木聚糖酶，其中所述木聚糖酶是Trichoderma?reesei木聚糖酶。

3.權利要求2的經過修飾的木聚糖酶，其中所述木聚糖酶是Trichoderma?reesei木聚糖酶II(XynII)。

4.權利要求1-3任一項的經過修飾的木聚糖酶，其中通過加入天冬氨酸或谷氨酸到C-末端，使得所加氨基酸與蛋白主體上合適的氨基酸間形成鹽橋，從而使該酶的C-末端區與該蛋白的主體相連。

5.權利要求1-4任一項的經過修飾的木聚糖酶，其中通過在Trichoderma?reesei木聚糖酶II(XynII)的氨基酸T2C和T28C之間或在所述G/11家族其它木聚糖的相應氨基酸之間形成二硫橋，使該酶的N-末端區與該蛋白的主體相連。

6.權利要求1的經過修飾的木聚糖酶，其中Trichoderma?reesei木聚糖酶II(XynII)中T2和T28位的氨基酸變為半胱氨酸，K58變為精氨酸，并將一個天冬氨酸加到該酶的C-末端(+191D)，從而在氨基酸T2C和T28C之間形成了二硫橋，并在氨基酸K58R和+191D之間形成了鹽橋。

7.權利要求1到3任一項的經過修飾的木聚糖酶，其中通過在Trichoderma?reesei木聚糖酶II(XynII)的氨基酸L105C和Q162C之間或在所述G/11家族其它木聚糖的相應氨基酸之間的二硫橋，使所述α-螺旋的C-末端部分與鄰近的β-鏈相連，從而使該酶的C-末端區通過二硫橋與該蛋白的主體相連。

8.一種改進G/11家族木聚糖酶的熱穩定性和/或擴展其pH范圍的方法，其包括進行下列步驟：

-通過二硫橋將該酶的N-末端區與該蛋白的主體相連，和/或

-通過鹽橋將該酶的C-末端區與該蛋白的主體相連，或

-通過二硫橋將該酶的α-螺旋與該蛋白的主體相連，或

-使該蛋白中單個氨基酸突變。

9.權利要求8的方法，其中將天冬氨酸或谷氨酸加入到C-末端，從而在該加入的氨基酸和該蛋白主體中合適的氨基酸之間形成鹽橋。

10.權利要求9的方法，其中在T.reesei木聚糖酶II(XynII)中，加入的天冬氨酸或谷氨酸與已改變為賴氨酸或精氨酸的第58位氨基酸間形成鹽橋。

11.權利要求8的方法，其中在T.reesei木聚糖酶II(XynII)中，氨基酸T2和T28已變為半胱氨酸，K58已變為精氨酸，并在其C-末端加入了天冬氨酸(+191D)，這樣就在氨基酸T2C和T28C之間形成了二硫橋，在K58R和+191D之間形成了鹽橋。

12.權利要求8的方法，其中進行了單氨基酸突變。

13.權利要求12的方法，其中在T.reesei木聚糖酶II(XynII)中進行了N11D的修飾。