[發明專利]一種使用混合吸附色譜分離純化貽貝粘蛋白的方法有效
| 申請號： | 200710179491.0 | 申請日： | 2007-12-14 |
| 公開（公告）號： | CN101348520A | 公開（公告）日： | 2009-01-21 |
| 發明（設計）人： | 孟桂鳳;邢思亮 | 申請（專利權）人： | 北京康銘優盛生化技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K1/36 | 分類號： | C07K1/36;C07K1/34;C07K4/12;C07K14/44 |
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| 地址： | 100086北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 使用 混合 吸附 色譜 分離 純化 貽貝 蛋白 方法 | ||
1.一種使用混合吸附色譜分離純化貽貝粘蛋白的方法，其特征在于：該方法的步驟為：
1)以1％高氯酸為提取溶劑，100g貽貝足絲加300ml提取溶劑，15℃浸提15min，使用攪拌器將冷凍的貽貝足絲高速打碎使其均勻懸浮于提取溶劑中；
2)以45μm濾膜過濾去除殘渣，保留上清；
3)用Sephadex?G-25去除小分子化合物，流動相為pH?3.0的30mM的醋酸鈉緩沖液，添加0.2M氯化鈉，收集穿透峰；
4)以Millipore?CENTRIPLUS超濾膜濃縮餾分；
5)采用Superose?12pg，柱體積50ml，洗脫液包括0.2M氯化鈉，300ml，乙酸0-20％梯度洗脫；
6)以Millipore?CENTRIPLUS超濾膜濃縮餾分；
7)用3％的檸檬酸4℃透析，4℃保存；
8)從分子量的角度鑒定貽貝粘蛋白：采用15％濃度的十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，硝酸銀染色，20℃染色2h，以高分子量標準蛋白質標記，確認目標蛋白質分子量為130kD；
9)四氮唑藍特異性染色鑒定貽貝粘蛋白：采用12.5％濃度的乙酸-尿素聚丙烯酰胺凝膠電泳，染色液采用pH值為10的四氮唑藍-氨基乙酸溶液，20℃染色1.5h，貽貝粘蛋白將被特異性顯色；
10)用C8反相鍵合相硅膠色譜柱分析貽貝粘蛋白純度：C8色譜柱4.6×250mm，5μm，以乙腈-水為流動相等度洗脫，280nm檢測，其中，乙腈和水的比例為15∶85。
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