[發(fā)明專利]一步三重RT－PCR快速檢測(cè)百合三種病毒的方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200710178693.3 | 申請(qǐng)日： | 2007-12-04 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101220396A | 公開(kāi)（公告）日： | 2008-07-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 明軍;徐榕雪;劉春;穆鼎;湯庚國(guó);王曉武;劉博 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/70 | 分類號(hào)： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 張濤 |
| 地址： | 100081北京市中關(guān)村南*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一步 三重 rt pcr 快速 檢測(cè) 百合 病毒 方法 | ||
1.一步三重RT-PCR快速檢測(cè)百合三種病毒的方法，包括cDNA的合成與三重RT-PCR擴(kuò)增步驟，其特征在于，所述三重RT-PCR擴(kuò)增體系中含有下列三對(duì)引物：
CMV1：5’-ATGGACAAATCTGAATCAACCAG，
CMV2：5’-TCAGACTGGGAGCACTCCG；
LSV1：5’-ATGCAATCAAGACCAGCACAAG，
LSV2：5’-TTTGTGTATCGATGATTTCGG；
LMoV1：5’-GCAAATGAGACACTTAACGCT，
LMoV1：5’-CATAGAAATTCCAAGTAAGGGG..
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述RT-PCR擴(kuò)增條件為：30個(gè)循環(huán)，72℃延伸5min，最后于4℃結(jié)束。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述RT-PCR擴(kuò)增體系中加入的是總RNA提取物，cDNA的合成與三重RT-PCR擴(kuò)增體系是一步完成的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，所述cDNA的合成條件為：42℃下反轉(zhuǎn)錄30min，95℃4min，94℃20s，52℃30s，72℃40s，72℃5min，30個(gè)循環(huán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述該方法中還包括假陽(yáng)性檢測(cè)步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，所述假陽(yáng)性檢測(cè)是將PCR產(chǎn)物回收、純化、重組質(zhì)粒、PCR鑒定、再經(jīng)序列比對(duì)確定。
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