[發(fā)明專利]一種改進的農桿菌介導浸花法轉化禾本科作物的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200710178499.5 | 申請日: | 2007-11-30 |
| 公開(公告)號: | CN101186926A | 公開(公告)日: | 2008-05-28 |
| 發(fā)明(設計)人: | 夏勉;張會新;凌莉 | 申請(專利權)人: | 北京未名凱拓農業(yè)生物技術有限公司 |
| 主分類號: | C12N15/82 | 分類號: | C12N15/82;C12N15/87 |
| 代理公司: | 北京君尚知識產權代理事務所 | 代理人: | 李稚婷 |
| 地址: | 100085北京市*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 改進 桿菌 介導浸花法 轉化 禾本科 作物 方法 | ||
1.一種轉化禾本科作物的方法,包括以下步驟:
1)將含有目的基因的農桿菌用滲透培養(yǎng)基懸浮,所述滲透培養(yǎng)基含有SilwetL-77、曲拉通X-100和赤霉素;
2)在活體條件下進行浸花法轉化:將待轉化的禾本科作物目的植株的全部花序或雌蕊部分浸泡于所述滲透培養(yǎng)基中,或者將所述滲透培養(yǎng)基噴灑于花序或雌蕊上,利用農桿菌將目的基因整合到目的植株基因組中。
2.根據權利要求1所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述滲透培養(yǎng)基中Silwet?L-77的用量為50-500μl/L。
3.根據權利要求1所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述滲透培養(yǎng)基中曲拉通X-100的用量為50-500μl/L。
4.根據權利要求1所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述滲透培養(yǎng)基中赤霉素的用量為1-10μg/L。
5.根據權利要求1所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述含有目的基因的農桿菌的獲得是將目的基因插入到表達載體中,再將該表達載體導入農桿菌中。
6.根據權利要求5所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述表達載體選自:pBin系列載體、pBI系列載體、Gateway系列載體、pCAMBIA系列載體。
7.根據權利要求1所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述農桿菌選自下列菌株:LBA4404、GV3101、EHA105。
8.根據權利要求1所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述步驟2)的轉化過程每天進行一次,共重復三次,每次浸染后用硫酸鈉紙袋將處理過的花序套住,紙袋于最后一次轉化后的24hr后去掉。
9.根據權利要求1~8中任一權利要求所述的轉化禾本科作物的方法,其特征在于:所述禾本科作物為甜高粱、谷子或玉米。
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