[發明專利]人與動物共患結核病熒光PCR快速診斷試劑盒

無效

• 申請號: 200710176890.1
• 申請日: 2007-11-06
• 公開（公告）號: CN101168780A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 陳茹;高小博;楊國海;劉中勇;曾碧健;林志雄
• 申請（專利權）人: 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;北京盈九思科技發展有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 李超

技術領域

本發明涉及一種人與動物共患結核病熒光PCR快速診斷試劑盒，更具體地說是針對引起人、畜、禽結核病的各種病原菌或病原菌復合群提供實時熒光PCR快速檢測方法和診斷試劑，包括檢測結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、禽分枝桿菌和結核分枝桿菌復合群的實時熒光PCR方法和試劑，屬于生物技術領域。

背景技術

結核病是威脅人類及動物健康的重大傳染病。世界衛生組織(WHO)專門發布了全球結核控制戰略，并把每年的3月24號定為世界防治結核病日。結核分枝桿菌復合群(Mycobacterium?tuberculosis?complex，MTC)是人及哺乳動物的結核病原菌，包括結核分枝桿菌(又稱人型結核分枝桿菌，Mycobacterium?tuberculosis，M.tuberculosis)，牛分枝桿菌(牛型結核分枝桿菌，Mycobacterium?bovis，M.bovis)，卡介苗BCG(Mycobacterium?bovis?BCG，BCG)，非洲分枝桿菌(Mycobacterium?africanum，M.africanum)和田鼠分枝桿菌(Mycobacterium?microti，M.microti)。其中，結核分枝桿菌、牛分枝桿菌為主要的人畜結核致病菌。

人結核病主要由結核分枝桿菌(M.tuberculosis，又稱人型結核分枝桿菌)引起。據統計，世界約1/3人口感染結核分枝桿菌，每年約300萬人死于人結核。我國結核病患者數量位居世界第二位。結核分枝桿菌可感染牛、豬等動物，引起動物結核病，存在通過動物進一步擴大在人畜間傳染的危險。

牛分枝桿菌(M.bovis，又稱牛型結核分枝桿菌)是牛結核病的主要致病菌。牛分枝桿菌還可感染人、豬、猴、鹿等約50種溫血動物和20多種禽類。牛結核病被世界動物衛生組織(OIE)列為B類疫病，是進出境動物重點檢疫的疫病之一。據報道，牛結核病所造成的損失大于牛的其他各種疾病所造成的損失總和，每年牛結核病給世界造成的經濟損失達30多億美元。牛結核病在世界各國均有發生，在我國依然是最常見的多發性疾病。發達國家紛紛制定牛結核病根除計劃，我國也由政府組織每年春、秋季開展牛結核防疫工作。

牛分枝桿菌和結核分枝桿菌感染人類或動物引起的結核病變臨床不能區分。調查表明，牛群中的牛結核感染與人群中結核病發病有直接關聯，特別是在未執行牛結核根除計劃的發展中國家。牛分枝桿菌傳播感染人類造成公共衛生難題。由牛分枝桿菌感染引起的人肺結核可達5％-10％以上。WHO專家委員會曾指出：“除非撲滅牛結核病，否則人類結核病的控制不會成功”。此外，艾滋病患者合并感染牛分枝桿菌的情況正得到愈來愈多的關注。另一方面，由于牛分枝桿菌可通過牛奶排出，奶制品中牛分枝桿菌的污染及其與人肺結核的關聯在發達國家早已得到重視，并采取針對性措施。

禽結核病主要在家禽中發生，被OIE列為B類疫病，被我國列為三類動物疫病。該病由禽分枝桿菌(Mycobacterium?avium，M.avium，又稱鳥分枝桿菌，禽型結核分枝桿菌)引起。禽分枝桿菌還可感染豬、牛等大動物，除危害家畜健康，其感染還干擾牛結核菌素皮試(PPD)結果，造成假陽性，影響牛結核病防治、根除及進出境動物檢疫。

禽分枝桿菌、副結核分枝桿菌均屬禽分枝桿菌復合群(Mycobacterium?aviumcomplex，MAC)。該群除上述兩種病原菌外，還包括胞內分枝桿菌(Mycobacteriumintracellulare)和瘰疬分枝桿菌(Mycobacterium?scrofulaceum)。近年來，MAC在人群中的感染呈上升趨勢，眾多的臨床實例表明MAC是與艾滋病合并感染的主要非結核分枝桿菌。

綜上所述，人及動物的結核、副結核病涉及多種病原菌，它們均屬分枝桿菌屬，結構相似，抗原性有交叉，常規方法難于鑒別。針對相關病原菌或病原菌復合群建立可靠的鑒別、鑒定技術，是有效防控和診治結核、副結核病的重要技術保障，對于公共衛生，養殖業健康發展、動物進出口貿易以及奶制品食品安全均具有重要意義。

目前國內外用于診斷結核病的檢驗方法，大體上可分為3類：第一類是細菌學檢驗方法，如染色鏡檢、細菌培養和動物接種等；第二類是采用免疫學方法檢測結核菌的特異性抗體，如皮內變態反應、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和補體結合試驗(CF)方法等；第三類是采用分子生物學檢驗方法，如PCR-RFLP、PCR-核酸探針、多重PCR等。