[發明專利]人與動物共患結核病熒光PCR快速診斷試劑盒

無效

• 申請號: 200710176890.1
• 申請日: 2007-11-06
• 公開（公告）號: CN101168780A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 陳茹;高小博;楊國海;劉中勇;曾碧健;林志雄
• 申請（專利權）人: 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;北京盈九思科技發展有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 李超

1.一組檢驗人與動物共患結核病的核苷酸序列，其特征在于：是序列表SEQ?IDNo.1至序列表SEQ?ID?No.12所示的核苷酸序列，其中：

SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2為檢驗結核分枝桿菌的引物對，SEQ?ID?No.3為檢驗結核分枝桿菌的探針序列；

SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6為檢驗牛分枝桿菌的引物對，SEQ?ID?No.7為檢驗牛分枝桿菌的探針序列；

SEQ?ID?No.9和SEQ?ID?No.10為檢驗禽分枝桿菌的引物對，SEQ?ID?No.11為檢驗禽分枝桿菌的探針序列；

SEQ?ID?No.13和SEQ?ID?No.14為檢驗結核分枝桿菌復合群的引物對，SEQ?IDNo.15為檢驗結核分枝桿菌復合群的探針序列。

2.根據權利要求1所述的一組檢驗人與動物共患結核病的核苷酸序列，其特征在于所述序列為：

(1)引物SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所組成的引物對、SEQ?ID?No.1和SEQ?IDNo.2的互補序列，以及引物SEQ?ID?No.1向5’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQID?No.2向3’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQ?ID?No.1和引物SEQ?ID?No.2擴增的核酸序列SEQ?ID?No.4，擴增序列SEQ?ID?No.4向5’端和3’端各延伸10個堿基的核酸序列以及各自的互補序列；

(2)引物SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所組成的引物對，SEQ?ID?No.5和SEQ?IDNo.6的互補序列，以及引物SEQ?ID?No.5向5’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQID?No.6向3’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQ?ID?No.5和引物SEQ?ID?No.6擴增的核酸序列SEQ?ID?No.8，擴增序列SEQ?ID?No.8向5’端和3’端各延伸10個堿基的核酸序列以及各自的互補序列；

(3)引物SEQ?ID?No.9和SEQ?ID?No.10所組成的引物對，SEQ?ID?No.9和SEQ?IDNo.10的互補序列，以及引物SEQ?ID?No.9向5’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQ?ID?No.10向3’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQ?ID?No.9和引物SEQ?IDNo.10擴增的核酸序列SEQ?ID?No.12，擴增序列SEQ?ID?No.12向5’端和3’端各延伸10個堿基的核酸序列以及各自的互補序列；

(4)引物SEQ?ID?No.13和SEQ?ID?No.14所組成的引物對，SEQ?ID?No.13和SEQID?No.14的互補序列，以及引物SEQ?ID?No.13向5’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQ?ID?No.14向3’端延伸10個堿基的核酸序列，引物SEQ?ID?No.13和引物SEQ?IDNo.14擴增的核酸序列SEQ?ID?No.16，擴增序列SEQ?ID?No.16向5’端和3’端各延伸10個堿基的核酸序列以及各自的互補序列；

(5)結核分枝桿菌的探針序列SEQ?ID?No.3，SEQ?ID?No.3的互補序列，以及探針的5’端和向上延伸10個堿基和3’端向下延伸10個堿基區域范圍內得到的探針序列及其互補序列；

(6)牛分枝桿菌的探針序列SEQ?ID?No.7，SEQ?ID?No.7的互補序列，以及探針的5’端和向上延伸10個堿基和3’端向下延伸10個堿基區域范圍內得到的探針序列及其互補序列；

(7)禽分枝桿菌的探針序列SEQ?ID?No.11，SEQ?ID?No.11的互補序列，以及探針的5’端和向上延伸10個堿基和3’端向下延伸10個堿基區域范圍內得到的探針序列及其互補序列；

(4)結核分枝桿菌復合群的探針序列SEQ?ID?No.15，SEQ?ID?No.15的互補序列，以及探針的5’端和向上延伸10個堿基和3’端向下延伸10個堿基區域范圍內得到的探針序列及其互補序列。

3.人與動物共患結核病熒光PCR快速診斷試劑盒，其特征在于包括：

1)4種PCR反應液，各含：1×PCR緩沖液；0.2μmol/L引物I；0.2μmol/L引物II，0.1μmol/L探針；200μmol/L?d?NTP，MgCl₂?2.5mmol/L；

2)Taq酶2.5U/μl；

3)陰性對照：生理鹽水

4)陽性對照：攜帶有擴增產物的質粒DNA

4種RT-PCR反應液分別為：結核分枝桿菌反應液、牛分枝桿菌反應液、禽分枝桿菌反應液和結核分枝桿菌復合群反應液；

結核分枝桿菌反應液中的引物I為SEQ?ID?No.1，引物II為SEQ?ID?No.2，探針為SEQ?ID?No.3；

牛分枝桿菌反應液中的引物I為SEQ?ID?No.5，引物II為SEQ?ID?No.6，探針為SEQ?ID?No.7；

禽分枝桿菌反應液中的引物I為SEQ?ID?No.9，引物II為SEQ?ID?No.10，探針為SEQ?ID?No.11；

結核分枝桿菌復合群反應液中的引物I為SEQ?ID?No.13，引物II為SEQ?ID?No.14，探針為SEQ?ID?No.15，

所述探針5’端標記FAM、HEX、TET、JOE、ROX或VIC等熒光染料，探針3’端標記TAMARA、Elcipse或BHQ淬滅標記。