[發(fā)明專利]一種免疫納米磁性葡聚糖微球的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710176211.0
• 申請日: 2007-10-23
• 公開（公告）號: CN101143888A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳海生;張華英;陳寶俊;劉金靜;劉亞寧;郭麗峰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京博邁世紀(jì)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K1/04
• 分類號: C07K1/04;C07K17/10
• 代理公司: 北京華誼知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 劉月娥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物分離技術(shù)領(lǐng)域，特別是提供了一種生物磁性分離簡便方法，適用于各種生物學(xué)方面的分離。

背景技術(shù)

本發(fā)明涉及葡聚糖納米磁性微球的制備方法，磁性微球粒徑在50-100nm左右，主要應(yīng)用在核酸，蛋白質(zhì)，細(xì)胞，免疫學(xué)測試方面的應(yīng)用。

葡聚糖(dextran)，又名右旋糖苷，是具有線狀主鏈的一類多糖，主要又1，6-α—D—吡喃糖苷連接在一起，本身及其在體內(nèi)的降解產(chǎn)物(CO2、H2O)對人體無毒，作為血液擴(kuò)容劑在臨床上應(yīng)用已有五十多年的歷史，另外。葡聚糖分子在弱酸或弱堿的環(huán)境下都能穩(wěn)定存在(JANES?KA，CALVO?P，ALONSO?MJ，Polusaccharide?colloidal?particles?as?delivery?systems?for?macromolecules[J].?Adv?Drug??Deliv??Rev，2001，47(1)：83-97.)，結(jié)構(gòu)中含有大量的“OH”，能與某些大分子形成緊密的連接。近二十年間，人們發(fā)現(xiàn)葡聚糖和某些大分子偶聯(lián)在一起后，表現(xiàn)出了一些意想不到的效應(yīng)。如和某些藥物或蛋白質(zhì)、酶等連接，可以增強(qiáng)藥物或蛋白質(zhì)在體內(nèi)的生物穩(wěn)定性，延長半衰期，并降低其免疫原性.葡聚糖是天然多糖類層析介質(zhì)，早在20世紀(jì)中期就已經(jīng)出現(xiàn)了，它具有理想介質(zhì)的許多特性：高親水性、粒徑小、含有較多的可活化羥基、不與生物大分子發(fā)生非特異性吸附，是迄今為止應(yīng)用最廣泛的一種層析、疏水和離子交換色譜的介質(zhì)之一。近年來，核酸，細(xì)胞，蛋白，免疫學(xué)測試與純化在生物學(xué)實際工作中起著一個重要的角色。隨著重組DNA技術(shù)和細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展，各種生物活性物質(zhì)如細(xì)胞、酶、抗體和核酸等的大量生產(chǎn)成為可能。這些生物活性物質(zhì)的附加價值極高，但在原料液中含量比較低。因此，低成本、高效率純化目的產(chǎn)物及有效除去有害物質(zhì)，達(dá)到一個高純度的分離產(chǎn)物是這些生物產(chǎn)物分離純化過程所追求的目標(biāo)。從樣品液中分離、提純于檢測各種核酸DNA、RNA、蛋白質(zhì)和細(xì)胞等是生命科學(xué)以及臨床醫(yī)學(xué)中一個重要的環(huán)節(jié)。實際樣品液中的分離、純化在時間上和經(jīng)費上都占相當(dāng)大的比重，甚至占到80％以上。目前常用的分離方法有沉淀法，離心法，離子交換法、各種色譜法等，這是有些方法需要比較昂貴的儀器設(shè)備，有些方法盡管簡單易行操作，但是分離效果差；有些方法操作復(fù)雜費時，使它們在應(yīng)用上受到了極大的限制。現(xiàn)代對樣品制備的要求是能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、小型化；不使用或盡量少使用有毒試劑；速度快、高效；產(chǎn)物適于后續(xù)生物操作，成本低等特點。20世紀(jì)80年代開始有學(xué)者將磁穩(wěn)流化床用于生物產(chǎn)物的分離。磁穩(wěn)流化床是一種集成份分離過程、分離速度床、固定床和磁分離技術(shù)的優(yōu)點集于一身，既可以減少離心或者過濾等單元操作步驟、分離速度快、操作條件溫和、過程效率高、產(chǎn)物活性收率高、降低分離純化的成本，生物分離中具有誘人的開發(fā)前景。磁穩(wěn)流化床的核心是磁性分離介質(zhì)，因此適用于磁穩(wěn)流化床的磁性分離介質(zhì)的合成是磁穩(wěn)流化床操作實現(xiàn)的關(guān)鍵。

但是到目前為止商品化的產(chǎn)品主要集中在國外產(chǎn)品，雖然性能比較好，但是價格昂貴，讓一些研究機(jī)構(gòu)和中小企業(yè)望而卻步，而且磁性微球粒徑主要集中在微米級，粒徑大，同時大部分磁性微球的所包被的有機(jī)層，有些包被一些糖類的物質(zhì)但是由于物理吸附或者通過簡單的化學(xué)鍵連接而成，易脫落，并且粒經(jīng)分布寬，不均勻(Steefan?Miltenyi.：High?Gradient?Magnetic?Cell?Separation?With?MACS.JCytometry?11：231-238(1990)，這樣對于有些分離受到限制，同時在蛋白包被過程中過程中，常常使用使用溴化氰，然而溴化氰有劇毒，還有溴化氰活化后的基質(zhì)上的配基常常有泄漏現(xiàn)象(Clonis?YD，Small?DAP.High-performance?dye-ligandChromatograph.ln????Reactive????in?Protein????and????EnzymeTechnology(M).London：Macmillan?Press，1?987.87-100)。

因此本發(fā)明的一個目的是制備了一種通過加入一種交聯(lián)劑使在氧化鐵外面包裹一層結(jié)實的天然活性物質(zhì)葡聚糖連接有免疫磁性微球，粒徑小，粒徑分布窄，具有天然的生物活性，通用性強(qiáng)，價格低廉，偶聯(lián)劑為無毒的化學(xué)偶聯(lián)劑，活化性機(jī)制的配基完善。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明在于提供一種免疫納米磁性葡聚糖微球的制備方法，實現(xiàn)了粒徑窄，重復(fù)性好，價格低廉，使免疫納米葡聚糖磁性微球具有天然活性。

本發(fā)明工藝步驟如下：