[發明專利]一種免疫納米磁性葡聚糖微球的制備方法

有效

• 申請號: 200710176211.0
• 申請日: 2007-10-23
• 公開（公告）號: CN101143888A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發明（設計）人: 陳海生;張華英;陳寶俊;劉金靜;劉亞寧;郭麗峰
• 申請（專利權）人: 北京博邁世紀生物技術有限公司
• 主分類號: C07K1/04
• 分類號: C07K1/04;C07K17/10
• 代理公司: 北京華誼知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉月娥

1.一種免疫納米磁性葡聚糖微球的制備方法，工藝步驟為：

(1)共沉淀法制備納米級的磁性氧化鐵粒子0.05-0.6mol/L；

(2)Fe²⁺∶Fe³⁺∶Ni²⁺為1∶(1.0-4.0)∶(0.2-0.8)摩爾比配成溶液，放入密閉反應瓶中，抽成真空，通入氮氣進行保護，溫度升溫至30-60℃，按上述離子溶液∶氫氧化鈉溶液為1∶0.2-1體積比以4-20毫升/分鐘速度將滴加氫氧化鈉溶液滴加到上述離子溶液1中，在500-3000轉/攪拌下反應，氫氧化鈉滴加完畢后，溫度升高到60-100℃，反應30-120分鐘，用去離子水清洗3-6遍，保存在20-50mM磷酸鹽緩沖液當中，2-8℃保存；

(3)葡聚糖包裹磁性氧化鐵粒子

a、葡聚糖的活化：0.5-3g/ml葡聚糖的醋酸鹽溶液2在100-500轉/分鐘攪拌下，按葡聚糖醋酸溶液：高碘酸鈉溶液以1∶0.08-0.5體積比向葡聚糖溶液中添加高碘酸鈉溶液，混合，20-25℃下避光反應30-70分鐘，反應結束后在2-8℃去離子水中透析20-24小時；將氧化的葡聚糖保存在去離子水中，2-8℃保存；

b、納米磁性葡聚糖微球：1體積的活化的50％葡聚糖和3-8體積50％未活化的葡聚糖混合配成溶液，按葡聚糖溶液∶氧化鐵磷酸鹽溶液以體積比1∶1的比例混合，100-500轉/分鐘攪拌，2-8℃反應24-50小時，按葡聚糖溶液∶氧化鐵磷酸鹽溶液以體積比1∶0.04-0.25的比例混合，混勻，2-8℃反應60-150分鐘；將上述溶液在磷酸鹽緩沖液中2-8℃透析20-24小時；保存在磷酸鹽緩液中，2-8℃貯存；

(4)納米磁性葡聚糖微球的蛋白的連接

a.納米磁性葡聚糖微球的活化：將納米葡聚糖磁性微球抽干，配制成0.5g/ml納米葡聚糖磁性微球的氫氧化鈉溶液中溶液，混合，按納米葡聚糖磁性微球溶液∶環氧氯丙烷以1∶0.08-0.4體積比混合，20-25℃反應6-10小時，丙酮、去離子水潤洗3-5次；保存在磷酸鹽緩沖液當中，2-8℃保存。

b.蛋白質的連接：30-100mg/ml納米磁性葡聚糖微球與0.5-2mg/ml蛋白質量比40-60∶1連接，20-25℃下反應2-4小時，然后在磁板上進行分離，用磷酸鹽緩沖液洗滌3-5次，磷酸鹽緩沖液保存，2-8℃貯存。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于，所屬的氧化鐵為Fe₃O₄或Fe₂O₃。

3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的葡聚糖為葡聚糖T20，葡聚糖T40，葡聚糖T100。

4.按照權利要求1所述的方法，其特征在于，所述氫氧化鈉溶液的濃度為0.5-5mol/L；高碘酸鈉溶液濃度為0.05-0.3mol/L；氧化鐵磷酸鹽溶液的濃度為30-80mg/ml。