[發明專利]脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗及其制備和應用

無效

• 申請號: 200710172046.1
• 申請日: 2007-12-11
• 公開（公告）號: CN101455846A
• 公開（公告）日: 2009-06-17
• 發明（設計）人: 徐薇;熊思東;岳艷;高海峰
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/04;C12N15/31;C12N15/79;A61P31/06
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 嚴新德

1.一種以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所述的結核基因疫苗由脫乙酰殼聚糖與結核抗原編碼質粒組成，所述的結核抗原編碼質粒由一個載體構成，在所述的載體中插入有結核分枝桿菌H37Rv株來源的熱休克蛋白HSP65的全長基因，所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的熱休克蛋白HSP65的全長基因中嵌合有來自結核分枝桿菌H37Rv株來源的抗原的4個T細胞表位多肽基因，所述的4個T細胞表位分別是結核分枝桿菌H37Rv株來源的ESAT-6?189～228抗原，結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85A?369～405抗原，結核分枝桿菌H37Rv株來源的CFP-10?162～207抗原，結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85B?420～459抗原，所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的熱休克蛋白HSP65基因的DNA序列如SEQ?ID?NO：2所示，所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的ESAT-6?189～228抗原的DNA序列如SEQ?ID?NO：4所示，所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85A?369～405抗原的DNA序列如SEQ?ID?NO：6所示，所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的CFP-10?162～207抗原的DNA序列如SEQ?ID?NO：8所示，所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85B?420～459抗原的DNA序列如SEQ?ID?NO：10所示，在結核分枝桿菌H37Rv株來源的熱休克蛋白HSP65全長基因中的第438位堿基后插入結核分枝桿菌H37Rv株來源的ESAT-6?189～228抗原基因、第486位堿基后插入結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85A?369～405抗原基因、第1185位堿基后插入結核分枝桿菌H37Rv株來源的CFP-10?162～207抗原基因和結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85B?420～459抗原基因，所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的CFP-10?162～207抗原基因和所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85B?420～459抗原基因?之間以gccgcctac基因序列相連接，嵌合了結核分枝桿菌H37Rv株來源的4個T細胞表位基因的結核分枝桿菌H37Rv株來源的熱休克蛋白HSP65的全長基因所構成的外源目的基因的DNA序列如SEQ?ID?NO：12所示。

2.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所述的載體為真核表達質粒，所述的真核表達質粒選自pcDNA3.1質粒或pVAX1質粒中的任意一種。

3.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的熱休克蛋白HSP65的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

4.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的ESAT-6?189～228抗原的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

5.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85A?369～405抗原的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：5所示。

6.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的CFP-10?162～207抗原的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：7所示。

7.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所述的結核分枝桿菌H37Rv株來源的Ag85B?420～459抗原的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：9所示。

8.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：嵌合了結核分枝桿菌H37Rv株來源的4個T細胞表位基因的結核分枝桿菌H37Rv株來源的熱休克蛋白HSP65的全長基?因所構成的外源目的基因蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：11所示。

9.根據權利要求1所述的以脫乙酰殼聚糖遞送系統組裝的結核基因疫苗，其特征在于：所用的脫乙酰殼聚糖的分子量在380000～420000之間，脫乙酰度為75％-85％。