[發明專利]一種用于組織填充的交聯透明質酸微粒凝膠的制備方法

無效

• 申請號: 200710171444.1
• 申請日: 2007-11-30
• 公開（公告）號: CN101244290A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 葛翠蘭;顧其勝;朱彬;劉秀杰
• 申請（專利權）人: 顧其勝;葛翠蘭
• 主分類號: A61L27/20
• 分類號: A61L27/20;A61L31/04
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司
• 代理人: 翁若瑩

技術領域

本發明涉及一種用于組織填充的交聯透明質酸微粒凝膠的制備方法，尤其涉及一種水不溶性的交聯透明質酸微粒凝膠的制備方法，該凝膠可通過注射針頭植入到軟組織中，起填充除皺、填充凹陷和豐唇等作用，屬于醫學美容和生物醫療技術領域。

背景技術

透明質酸是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖雙糖相互結合構成的線性高分子多糖，廣泛存在于哺乳動物的結締組織、雞冠和鏈球菌的夾膜中。透明質酸屬于一種生理性物質，具有高度的粘彈性、良好的生物相容性和無免疫原性，不具有種屬特異性，當植入到人體內之后不引起異體排斥反應和過敏反應，所以在醫療、美容行業得到了廣泛應用。但是天然的外源性透明質酸的分子量水溶性高，在體內很快被酶和自由基降解，在皮膚組織中的半衰期僅為12小時，這樣就限制了其在組織填充等方面的應用，因為這些應用需要透明質酸在體內有較長的保留時間。

通過對透明質酸分子進行改構，可以在保留透明質酸原有生物相容性的同時，改變透明質酸的某些理化屬性，并拓寬其臨床應用效果。改構透明質酸的方法主要有：修飾和交聯。交聯透明質酸的原理是使用一種或多種組合的化學交聯劑，利用交聯劑自身存在的基團與透明質酸上相關的一個或多個基團(羧基、羥基和乙酰基)發生反應，使透明質酸分子之間交聯在一起，而形成三維網絡結構。交聯透明質酸具有水溶性低、穩定性好和粘彈性優良等優點。目前已經知道有多種制備交聯透明質酸方法。例如，美國專利4,582,865公開了利用二乙烯基砜作為交聯劑制備透明質酸凝膠的方法；美國專利5,356,883公開了利用碳二亞胺與透明質酸或其鹽的羧基發生交聯反應的方法；美國專利5,827,937公開了通過兩步交聯反應得到交聯多糖凝膠的方法；中國專利CN1342171A描述了多重交聯的透明質酸衍生物的生產方法；中國專利CN1590444描述了透明質酸經脫蛋白質處理后，用縮水甘油醚交聯制得透明質酸凝膠的過程。但是，上述專利只敘述了交聯透明質酸凝膠塊的制備過程，對凝膠中的雜質即未反應的交聯劑的去除、制備成可注射凝膠的工藝以及凝膠生物相容性等方面，未進行描述。

發明內容

本發明的目的是提供一種能去除凝膠中雜質的用于組織填充的交聯透明質酸微粒凝膠的制備方法。

為實現以上目的，本發明的技術方案是提供一種用于組織填充的交聯透明質酸微粒凝膠的制備方法，其特征在于，其步驟為：

第一步.將分子量為50-300萬道爾頓的透明質酸原料溶解于pH＞10、濃度為0.05-4.0M堿性溶液中，配制成5-20％透明質酸堿性溶液，加入交聯劑，交聯劑與透明質酸原料重量比為15∶1-1∶5，在多孔模具容器中，經交聯反應，反應溫度為25℃-50℃，反應時間為2小時-12小時，得到交聯透明質酸凝膠塊；

第二步.將交聯透明質酸凝膠塊加入到濃度為0.01-2M、pH值＜5的酸性溶液中，酸性溶液的量與凝膠塊重量比為1∶1-10∶1，室溫放置2小時-24小時，然后倒去鹽酸溶液，用生理平衡液清洗、透析，在至少2天內，更換6次以上生理平衡液，每次用于透析的生理平衡液量為凝膠體積的5-50倍，得到透明質酸濃度為0.5％-4.0％凝膠塊；

第三步.利用不銹鋼擠壓裝置，利用2kg-8kg的正壓力將凝膠塊通過孔徑為50μm-2000μm的多孔濾片擠出，將塊狀凝膠擠碎成高度粘彈性的微粒凝膠。

所述的透明質酸原料為細菌發酵來源的透明質酸鹽干粉，可選自透明質酸鈉、透明質酸鉀或透明質酸鈣；所述的堿性溶液為NaOH、KOH或者Na₂CO₃溶液；所述的交聯劑為雙環氧化物；所述的雙環氧化物為乙二醇二縮水甘油醚或丁二醇二縮水甘油醚。

所述的多孔模具容器的每孔容積為0.5ml-10ml，各孔大小一致，形狀相同，其材質為玻璃、塑料、聚四氟乙烯或不銹鋼。所述的多孔模具容器可選自細胞培養用12孔板、24孔板或48孔板。

本發明提供了一種交聯透明質酸凝膠中未參加交聯反應的雜質的去除方法，即提供了一種在酸性溶液中洗滌這些塊狀凝膠的方法。所述的酸性溶液為鹽酸、硫酸、磷酸或醋酸溶液。