[發(fā)明專利]一個(gè)與亞麻抗銹病基因相連鎖的分子標(biāo)記及其建立方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710171121.2
• 申請(qǐng)日: 2007-11-28
• 公開（公告）號(hào): CN101445823A
• 公開（公告）日: 2009-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薄洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 薄洋
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一個(gè)與亞麻抗銹病基因相連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于，所述的分子標(biāo)記OPA18₄₃₂，是用下述方法得到的：

(1)、利用亞麻高抗銹病親本NM4與高感銹病親本Bison進(jìn)行雜交得到F1代，再經(jīng)過自交獲得F2分離群體；

(2)、用SDS方法提取F2代單株的DNA，并選取10株典型的高抗銹病的單株DNA等量混合為抗病池(R池)，選取10株高感銹病的單株DNA混合為感病池(S池)；

(3)、利用兩個(gè)親本和兩個(gè)基因池篩選引物，再利用獲得的引物對(duì)F2代單株進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(4)、篩選出分子標(biāo)記OPA18₄₃₂。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的與亞麻抗銹病基因相連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于，是采用RAPD分子標(biāo)記進(jìn)行篩選的，具體的方法是：

(1)、親本間和基因池間DNA多態(tài)性分析：

以10bp寡核苷酸作為隨機(jī)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系為20μl，其中25mmol/L?MgCl₂?2.0μl，10×PCR?Buffer?2.0μl，10mmol/L?dNTP?0.5μl，5U/μL?Taq?E?0.5μl，20ng/μl?Primer?2.0μl，10ng/μl模板DNA?3μl，滅菌雙蒸水10μl，加蓋一滴礦物油進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，37℃退火1min，72℃延伸1.5min，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min后15℃保存。RAPD擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析采用濃度為15g/L的瓊脂糖凝膠(含0.15ng/L?EB)，電泳緩沖液為1×TAE，保持90V恒壓(4～5V/cm)電泳1.5～2h，凝膠成像儀成像分析；

(2)、分子標(biāo)記的連鎖性鑒定：

在同一條件下鑒定F2代分離群體的銹病發(fā)生情況，用Mapmaker/3.0軟件對(duì)分離群體單株的銹病抗性和分子標(biāo)記的分離數(shù)據(jù)進(jìn)行連鎖分析，利用Kosambi函數(shù)將重組率轉(zhuǎn)化為遺傳圖距cM(centimorgan)。

3、一種與亞麻抗銹病基因相連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于所說的分子標(biāo)記為OPA18₄₃₂。

4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的與亞麻抗銹病基因相連鎖的分子標(biāo)記的應(yīng)用，其特征在于，用于亞麻抗銹病的早期鑒定和針對(duì)該特性的分子標(biāo)記輔助育種。