[發明專利]無溶劑系統中固定化全細胞酶催化生產植物甾醇酯的方法

無效

• 申請號: 200710168653.0
• 申請日: 2007-12-07
• 公開（公告）號: CN101200754A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發明（設計）人: 胡小加;陳洪;江木蘭;董緒燕;劉昌盛;魏芳;張銀波;黃鳳洪
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12N11/08;C12R1/845
• 代理公司: 武漢開元專利代理有限責任公司
• 代理人: 黃行軍

1.無溶劑系統中固定化全細胞酶催化生產植物甾醇酯的方法，其特征在于它包括如下步驟：

1)固定化全細胞酶的制備：

(1)將葡枝根霉(Rhizopus?stolonifer)按常規方法配制成10²～10⁴孢子懸浮液，得葡枝根霉(Rhizopus?stolonifer)孢子懸浮液，備用；

(2)搖瓶培養基配制：按各組份所占質量百分比：全脂豆粉2.0％，菜籽油0.3～0.6％，磷酸氫二鉀1.2％，硫酸銨0.3％，硫酸鎂0.3％，磷酸二氫鈉0.4％，水95.2～95.5％；選取全脂豆粉、菜籽油、磷酸氫二鉀、硫酸銨、硫酸鎂、磷酸二氫鈉和水混合，得搖瓶培養基，備用；

(3)將聚氨酯剪切成3～5mm泡沫顆粒，備用；

(4)按100ml搖瓶培養基中加1～3ml葡枝根霉(Rhizopus?stolonifer)孢子懸浮液，100ml搖瓶培養基中加聚氨酯泡沫顆粒0.3～0.5g，將葡枝根霉(Rhizopus?stolonifer)和聚氨酯在搖瓶培養基中，26～30℃條件下培養40～60h；取出長滿葡枝根霉(Rhizopus?stolonifer)的聚氨酯泡沫顆粒，真空干燥，得固定化全細胞酶，備用；

2)酯化：將油酸、月見草油或食用大豆油中加入甾醇和固定化全細胞酶，置于水浴恒溫振蕩器中在溫度40～60℃、轉速100～300r/min的條件下進行酯化反應，反應時間46～50h，得酯化后的反應產物；其中，油酸、月見草油或食用大豆油與甾醇的質量比為3～7∶1；固定化全細胞酶為下述：(1)油酸、月見草油或食用大豆油，(2)甾醇，二種質量之和的1.0～1.7％；

3)離心分離、干燥：將酯化后的反應產物離心分離，離心后的上層液為植物甾醇酯產品；離心后的固體物冷凍干燥，得固定化全細胞酶催化劑。

2.根據權利要求1所述的無溶劑系統中固定化全細胞酶催化生產植物甾醇酯的方法，其特征在于：步驟3)所述的離心分離的條件是：2000～4000rpm，離心10～20min。

3.根據權利要求1所述的無溶劑系統中固定化全細胞酶催化生產植物甾醇酯的方法，其特征在于：步驟3)所述的冷凍干燥的條件是：-10～0℃，1mbar，干燥時間3～5小時。