[發(fā)明專利]春石斛組織培養(yǎng)快繁方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710160571.1
• 申請日: 2007-12-26
• 公開（公告）號: CN101180950A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭勇平
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江森禾種業(yè)股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所
• 代理人: 吳秉中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物快繁方法技術(shù)領(lǐng)域，具體為春石斛組織培養(yǎng)快繁方法。

背景技術(shù)

春石斛(Dendrobium)，蘭科(Orchidaceae)石斛屬，多年生草本，附生性，莖叢生，有節(jié)，黃綠色，葉近革質(zhì)，卵狀披針形，長9-12cm，總狀花序。我國有76種原生種，主要分布于云南、廣東、廣西、臺灣、海南等地。日本、泰國、新加坡等國家石斛蘭產(chǎn)業(yè)化規(guī)模已非常成熟，而且育種工作突出，培育出豐富的雜交品種，花色有紅色、白色、黃色及各種復(fù)合色，是當(dāng)前國內(nèi)外市場盆栽欣賞和切花生產(chǎn)的高檔花卉。石斛蘭雜交品種主要分為三大類：高貴石斛系(Dendrobium?nobile)、美麗石斛系(Dendrobium?formidible)、蝴蝶石斛系(Dendrobium?phaloenopsis)。高貴石斛系的花朵著生在莖的各節(jié)上，每節(jié)開花2-4朵，花梗短小只有1cm長，開花前必須經(jīng)過干燥低溫處理才能進(jìn)行花芽分化，花期主要集中在春季，冬季葉片往往會掉落，因此又叫春石斛；美麗石斛系開花時(shí)花朵聚生在假鱗莖的上部，一般在初夏時(shí)開花，也有在冬季和不定期開花，葉背面被有黑色細(xì)毛是其特征之一；蝴蝶石斛系花梗雖自假鱗莖頂部抽出，但長達(dá)50-80cm，著花5-20朵，冬季也需要高溫高濕才能正常生長，花期一般在秋冬季，為常綠不落葉類型，又叫秋石斛。春石斛傳統(tǒng)的扦插繁殖技術(shù)成苗率低，品質(zhì)差異明顯，使春石斛的繁殖技術(shù)面臨巨大的工廠化栽培壓力。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種春石斛組織培養(yǎng)快繁方法的技術(shù)方案，生產(chǎn)得到的春石斛種苗品質(zhì)高，一致性好。

所述的春石斛組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

1)選擇具有較好品種特征且生長健壯的春石斛幼莖作外植體，幼莖長度為3-5cm；

2)外植體的處理：剝?nèi)ビ浊o外面節(jié)上的葉片，洗凈后先用70-75％酒精浸潤或擦洗帶葉和葉鞘的幼莖，再剝?nèi)ハ虏咳~和葉鞘，留下包裹莖尖的1-2片葉，在0.1-0.15％升汞中浸泡6-8分鐘，然后在8-10％的NaClo溶液中浸泡15-20分鐘，最后用蒸餾水洗至無異味；

3)切除與消毒劑接觸過的外植體切面，在無菌接種室中，采用刀背擠壓法擠出莖尖，接種到具有初始培養(yǎng)基的試管中，一個(gè)試管接一個(gè)莖尖，于無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)10-15天；

4)誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)：將存活的莖尖轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)不定芽或原球莖，培養(yǎng)30-40天后轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)2-3個(gè)月；

5)繼代生根培養(yǎng)：

a)將步驟4)中生成的不定芽切割成單個(gè)的不定芽接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待苗生長至高3-5cm、有5片以上葉片和4-6條根時(shí)，進(jìn)行下步移栽；

b)取步驟4)中誘導(dǎo)成的原球莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)30-40天，再轉(zhuǎn)接到催芽培養(yǎng)基中催芽，生長30-40天后，將其切割成單個(gè)的不定芽接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待苗生長至高3-5cm、有5片以上葉片和4-6條根時(shí)，進(jìn)行下步移栽；

6)移栽：移栽前5-6天放于大棚中練苗，并提前1-2天把瓶蓋全部打開或打開一半，從試管中取出的幼苗用水將附著在根上的培養(yǎng)基沖掉，采用純水苔作為培養(yǎng)基質(zhì)，單株移栽到128孔穴盤中；

上述采用的培養(yǎng)基分別為初始培養(yǎng)基1/2Ms、誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/2Ms+BA1.0+NAA0.5、增殖培養(yǎng)基MS+BA1.5+NAA0.5+CH1g/L+5％香蕉、生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.3mg/L+10％香蕉、催芽培養(yǎng)基1/2Ms+BA0.2+NAA0.1；所述培養(yǎng)基的pH值為5.4-5.8，并在121-125℃、1.10-1.15Pa的條件下滅菌20-25分鐘。

所述的春石斛組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于移栽苗二周內(nèi)采用噴霧保持葉面濕潤狀態(tài)，二周后按干透濕透的原則澆水。

所述的春石斛組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于移栽苗第一周進(jìn)行70％遮光處理，一周以后進(jìn)行50％遮光處理。

所述的春石斛組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于移栽苗20-25天后每周施一次肥，前期肥料選擇花寶5號(3000*)或花多多N∶P∶K＝9∶45∶15(3000*)進(jìn)行葉面噴灑促使長根，后期選擇花多多N∶P∶K＝20∶20∶20(3000*)進(jìn)行葉面噴灑或根部澆灌。

所述的春石斛組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于滅菌后的培養(yǎng)基放入準(zhǔn)備區(qū)備用，準(zhǔn)備區(qū)每天用紫外燈消毒至少2小時(shí)。

所述的春石斛組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于在0.1-0.15％升汞中加2-3滴Tween?20。