[發明專利]春石斛組織培養快繁方法

有效

• 申請號: 200710160571.1
• 申請日: 2007-12-26
• 公開（公告）號: CN101180950A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 鄭勇平
• 申請（專利權）人: 浙江森禾種業股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所
• 代理人: 吳秉中

1.春石斛組織培養快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

1)選擇具有較好品種特征且生長健壯的春石斛幼莖作外植體，幼莖長度為3-5cm；

2)外植體的處理：剝去幼莖外面節上的葉片，洗凈后先用70-75％酒精浸潤或擦洗帶葉和葉鞘的幼莖，再剝去下部葉和葉鞘，留下包裹莖尖的1-2片葉，在0.1-0.15％升汞中浸泡6-8分鐘，然后在8-10％的NaClo溶液中浸泡15-20分鐘，最后用蒸餾水洗至無異味；

3)切除與消毒劑接觸過的外植體切面，在無菌接種室中，采用刀背擠壓法擠出莖尖，接種到具有初始培養基的試管中，一個試管接一個莖尖，于無菌培養室中培養10-15天；

4)誘導和增殖培養：將存活的莖尖轉接到誘導培養基上誘導不定芽或原球莖，培養30-40天后轉接到增殖培養基中進行增殖培養，培養2-3個月；

5)繼代生根培養：

a)將步驟4)中生成的不定芽切割成單個的不定芽接入生根培養基中培養，待苗生長至高3-5cm、有5片以上葉片和4-6條根時，進行下步移栽；

b)取步驟4)中誘導成的原球莖轉接到增殖培養基中進行增殖培養30-40天，再轉接到催芽培養基中催芽，生長30-40天后，將其切割成單個的不定芽接入生根培養基中培養，待苗生長至高3-5cm、有5片以上葉片和4-6條根時，進行下步移栽；

6)移栽：移栽前5-6天放于大棚中練苗，并提前1-2天把瓶蓋全部打開或打開一半，從試管中取出的幼苗用水將附著在根上的培養基沖掉，采用純水苔作為培養基質，單株移栽到128孔穴盤中；

上述采用的培養基分別為初始培養基1/2Ms、誘導培養基1/2Ms+BA1.0+NAA0.5、增殖培養基MS+BA1.5+NAA0.5+CH1g/L+5％香蕉、生根培養基1/2MS+IBA0.3mg/L+10％香蕉、催芽培養基1/2Ms+BA0.2+NAA0.1；所述培養基的pH值為5.4-5.8，并在121-125℃、1.10-1.15Pa的條件下滅菌20-25分鐘。

2.如權利要求1所述的春石斛組織培養快繁方法，其特征在于移栽苗二周內采用噴霧保持葉面濕潤狀態，二周后按干透濕透的原則澆水。

3.如權利要求1所述的春石斛組織培養快繁方法，其特征在于移栽苗第一周進行70％遮光處理，一周以后進行50％遮光處理。

4.如權利要求1所述的春石斛組織培養快繁方法，其特征在于移栽苗20-25天后每周施一次肥，前期肥料選擇花寶5號(3000*)或花多多N∶P∶K＝9∶45∶15(3000*)進行葉面噴灑促使長根，后期選擇花多多N∶P∶K＝20∶20∶20(3000*)進行葉面噴灑或根部澆灌。

5.如權利要求1所述的春石斛組織培養快繁方法，其特征在于滅菌后的培養基放入準備區備用，準備區每天用紫外燈消毒至少2小時。

6.如權利要求1所述的春石斛組織培養快繁方法，其特征在于在0.1-0.15％升汞中加2-3滴Tween?20。

7.如權利要求1所述的春石斛組織培養快繁方法，其特征在于無菌接種室在接種前30分鐘，打開紫外燈和超凈工作臺，20分鐘后關上，再過10分鐘進行接種。

8.如權利要求1所述的春石斛組織培養快繁方法，其特征在于無菌培養室使用前一個星期用40％甲醛溶液每平方10ml進行培養室薰蒸，關閉三天后開門通風一天，再用紫外燈消毒6小時。