[發明專利]重組人血管內皮抑制素組合物緩釋微球的制備方法

有效

• 申請號: 200710135102.4
• 申請日: 2007-11-08
• 公開（公告）號: CN101428142A
• 公開（公告）日: 2009-05-13
• 發明（設計）人: 孟博宇;李玲;劉春暉;許向陽;殷曉進
• 申請（專利權）人: 江蘇先聲藥物研究有限公司
• 主分類號: A61K38/39
• 分類號: A61K38/39;A61K38/17;A61K9/16;A61K9/50;A61K47/10;A61K47/26;A61K47/32;A61K47/34;A61K47/36;A61P35/00
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技術領域

一種重組人血管內皮抑制素組合物緩釋微球的制備方法，包括將含有親水性的重組人血管內皮抑制素的組合物直接分散在含有乳酸-羥基乙酸聚合物的有機溶劑中，揮發有機溶劑得到緩釋微球制劑。

背景技術

研究發現，實體瘤在生長和轉移過程中，需要血管的生成來提供營養，此時腫瘤細胞會發出一些信號來促進血管向腫瘤組織增生，一些內源性血管生成抑制因子如Angiostatin、Endostatin能夠阻礙血管在腫瘤組織中的生長，使腫瘤的生長和轉移處于停滯(O’Relly，M.S.，et?al.Cell.79：315-328，1994；O’Relly，M.S.，et?al.Cell.88：277-285，1997)，美國哈佛醫學院的Folkman教授在上世紀七十年代提出了用血管內皮抑素(Endostatin)來抑制腫瘤生長的“餓死腫瘤療法”理論。但由于Endostatin在表達制備過程中存在著易于沉淀和復性困難等問題，限制了其在腫瘤患者中的大規模應用。

羅永章教授等人通過修飾人血管內皮抑制素的核苷酸編碼序列，生產出N末端帶有9個附加氨基酸序列的重組人血管內皮抑制素(取名為：Endostar，中文名：恩度)(ZL00107569.1)，其氨基酸序列為：

(M) GGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGS

重組的人血管內皮抑制素恩度保持內源性Endostatin的所有生物活性，同時解決了Endostatin在生產過程中的難題，純化過程簡單，純度高，活性保存好，其注射液已經上市銷售，臨床上聯合NP化療方案用于非小細胞肺癌患者。

重組的的人血管內皮抑制素作為外源性蛋白，在體內很容易被免疫系統識別，進而被降解，因此體內半衰期很短，患者需要頻繁注射，臨床順應性很差。以乳酸-羥基乙酸聚合物為基質的生物可降解微球在上世紀八十年代已經被利用于多肽藥物的注射用緩釋制劑，例如如Takeda公司的Lupron?Depot，士Debiopharm公司的Trelstar?Depot和Novartis公司的SandostatinDepot等。多肽藥物在肌肉或皮下隨著聚合物材料不斷的生物降解緩慢釋放到體內，在較長?時間里維持體內有效的血藥濃度，釋放周期從一周到6個月不等，對于需要長期或終身給藥的疾病，病人的順應性大大提高。隨著分子生物學的發展，越來越多的大分子蛋白質藥物也需要借助這一緩釋平臺來克服藥物本身的缺陷。

緩釋微球制劑一般采用水包油包水或者油包油包水的方法制備，雖然方法不同，但是蛋白質藥物總是需要先存在于內水相中，與含有乳酸-羥基乙酸聚合物的有機溶劑在高速剪切或超聲的作用下形成初乳，再分散到外水相或外油相中。既有親水性部分又有疏水性內核的蛋白在此過程中很容易分布在油水界面上，發生構向的改變，又在有機溶劑的影響下發生降解；而且高濃度的內水相也會導致蛋白的聚集或者絮凝，這些均影響了其在制劑中的生理活性。

WO?96/07399公開了一種緩釋微球的制備方法。該方法包括將水溶性肽類藥物和氯化鋅水溶液等溶于水的多價金屬鹽形成復合物，再與可生物降解材料制備緩釋制劑。EP-A-0052510記載了采用凝聚劑如礦物油或植物油，利用相分離方法制備微球。

雖然采用了很多方法可以保護蛋白質藥物的活性。內水相的體積限制了微球制劑的載藥量，同時在內水相向外相的遷移過程中，藥物及容易泄露，制劑的包封產率降低，同時藥物也容易分布在制劑的表面而造成較大的突釋。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有的微球制備方法中存在的問題，提供一種包封產率高，突釋小，活性保持良好的重組的人血管內皮抑制素組合物緩釋微球制劑的制備方法。

本發明中的重組的人血管內皮抑制素組合物緩釋微球制劑可以用于可皮下注射、肌肉注射或瘤內注射。該制劑適合在制備用于持續釋放重組人血管內皮抑制素的可注射藥物中的用途。

本發明的制備方法步驟為：

(a)在重組人血管內皮抑制素溶液中加入親水性物質冷凍干燥，得到重組人血管內皮抑制素與親水性物質中的組合物粉末；

(b)再將所得粉末混懸在含有乳酸-羥基乙酸聚合物的有機溶劑中分散；

(c)分散后加入到含有乳化劑的水相中，在常壓或減壓的條件下攪拌使溶劑揮發形成微球，揮發過程應控制一定的溫度；

(d)將所得微球洗滌干燥，得緩釋微球制劑成品。