[發(fā)明專利]乙型肝炎表面抗原和抗體的熒光檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710123129.1
• 申請(qǐng)日: 2007-06-27
• 公開（公告）號(hào): CN101334407A
• 公開（公告）日: 2008-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜池敏;鄭超斌;第五振軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京泛博生物化學(xué)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/52
• 分類號(hào): G01N33/52;G01N33/576
• 代理公司: 北京信慧永光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 薛俊英;王維玉

1、辣根過氧化物酶-多肽連接物，其中所述的辣根過氧化物酶與多肽共價(jià)結(jié)合，所述多肽的氨基酸序列在空間構(gòu)型上能被乙型肝炎表面抗原或抗體識(shí)別并結(jié)合。

2、按照權(quán)利要求1所述的辣根過氧化物酶-多肽連接物，其中所述多肽的氨基酸序列至少是模擬自然抗原的一個(gè)決定簇，能被固體基質(zhì)上吸附的乙型肝炎表面抗原或抗體識(shí)別并結(jié)合。

3、按照權(quán)利要求1或2所述的辣根過氧化物酶-多肽連接物，其中所述的多肽是由兩個(gè)或更多的氨基酸形成的多肽，通過一個(gè)氨基酸的羧基與另一個(gè)氨基酸的氨基形成的酰胺鍵相連；優(yōu)選所述多肽在肽鏈上含有不超過50個(gè)氨基酸；更優(yōu)選所述多肽在肽鏈上含有4～30個(gè)氨基酸；特別優(yōu)選其中所述多肽在肽鏈上含有15～30個(gè)氨基酸。

4、按照權(quán)利要求3所述的辣根過氧化物酶-多肽連接物，其中所述多肽具有以下氨基酸序列片斷：

Pro-Ser-Cys-Cys-Cys-Thr-Lys-Pro-Thr-Asp-Gly-Asn-Cys-Thr-Cys-Ile-Pro-Ile-Pro-Ser-Ser；

Pro-Ser-Cys-Cys-Cys-Thr-Lys-Pro-Ser-Asp-Gly-Asn-Cys-Thr-Cys-Ile-Pro-Ile-Pro-Ser-Ser；

Pro-Ser-Cys-Cys-Cys-Thr-Lys-Pro-Thr；或

Ser-Asp-Gly-Asn-Cys-Thr-Cys-Ile-Pro-Ile-Pro-Ser-Ser。

5、一種用于檢測(cè)乙型肝炎表面抗原或抗體的試劑盒，所述的試劑盒中含有權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的辣根過氧化物酶-多肽連接物和HRP熒光底物ADHP。

6、熒光檢測(cè)樣品中乙型肝炎表面抗原或抗體的方法，該方法包括以下步驟：

(1)將吸附有乙型肝炎表面抗體的固體基質(zhì)、被測(cè)樣品和權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的HRP標(biāo)記的多肽連接物或權(quán)利要求5的試劑盒中的試劑混合或接觸，得到的反應(yīng)混合物經(jīng)溫育和洗滌后，得到樣品1，所述被測(cè)樣品中可能含有乙型肝炎抗原和/或抗體；

(2)重復(fù)上一步驟，只是不加入被測(cè)樣品，所述的反應(yīng)混合物經(jīng)溫育和洗滌后，得到樣品2；

(3)將來自步驟(1)的樣品1和來自步驟(2)的樣品2在相同的條件下分別與ADHP混合孵化，并在發(fā)射波長(zhǎng)大于550nm的范圍檢測(cè)熒光強(qiáng)度；和

(4)比較兩者的熒光強(qiáng)度，如果樣品1的熒光強(qiáng)度低于樣品2的熒光強(qiáng)度，那么被測(cè)樣品中乙型肝炎表面抗體和/或抗原是陽性的。

7、按照權(quán)利要求6所述的方法，其中步驟1和2中所述的溫育溫度在大約37～50℃之間，孵化時(shí)間約1～8小時(shí)；或者溫育溫度在大約18～30℃之間，孵化時(shí)間大約為16～72小時(shí)。

8、按照權(quán)利要求6所述的方法，其中步驟1和2中所述的洗滌是用水洗滌。

9、按照權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的洗滌用的是pH＝6～8的緩沖液。

10、按照權(quán)利要求8或9所述的方法，其中所述的洗滌優(yōu)選使用pH≈7的等電鹽水溶液。