[發明專利]乙型肝炎表面抗原和抗體的熒光檢測方法

無效

• 申請號: 200710123129.1
• 申請日: 2007-06-27
• 公開（公告）號: CN101334407A
• 公開（公告）日: 2008-12-31
• 發明（設計）人: 杜池敏;鄭超斌;第五振軍
• 申請（專利權）人: 北京泛博生物化學有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N33/576
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 薛俊英;王維玉

技術領域

本發明涉及一種用于檢測乙肝肝炎表面抗原或抗體的新型熒光檢測試劑，含有該試劑的試劑盒，以及應用該試劑或試劑盒快速測定乙型肝炎表面抗原和抗體的熒光檢測方法；所述的熒光檢測試劑是辣根過氧化酶(HRP)標記的多肽和N-乙酰基-3，7-二羥基吩嗪(ADHP)。本發明的檢測方法可用來熒光檢測乙型肝炎表面抗原和抗體。

背景技術

抗原(Ag)是一種外來物質入侵被發現后，引起特殊反應的物質。抗原可以是蛋白質，多聚糖，核酸，脂肪，合成高分子以及微生物等，抗原可以通過某一極小尺寸來表征。抗原可象1000道爾頓那樣小，也可象100萬道爾頓那樣大。

外來入侵被抗原發現后，抗原就誘導人或動物的免疫系統做出相應的應答，從淋巴和血漿中合成并釋放出抗體，抗體是可與相應抗原發生特異性結合的反應免疫球蛋白。

抗體只與相應的抗原表面小的暴露部分結合。這個小的活性部分被稱作抗原決定簇(抗原表位)，抗體因而被構建成適合于抗原上一個裸露的具有獨特排列的化學基團的產物，并且與抗原表面其它區域不匹配。抗體的結合位點常常“識別”與抗原表位至少部分適合的相近的類似結構，總之，當適合度最好時，抗體和抗原結合的最緊密。相應地，任何一種測定抗原和抗體的合成試劑，必須具有相應的天然抗原決定簇的相似結構，以便被抗體識別后接合。

一個抗原是可以有一個或多個抗原決定簇的單體蛋白。由于它有限的大小，抗原決定簇僅代表整個蛋白表面較小的一段。

與抗原決定簇相應的氨基酸殘基在抗體和抗原的結合能上貢獻最高的，是具有支配作用的基團。在病毒外殼和復雜蛋白質聚合物內，相同或不相同的單體單位通過相互卷入部分對方表面的方法而相互作用。所有發生在單體(病毒結構的成分)部分的抗原決定簇被掩蓋了，只有當聚合物解聚時才可利用。這些抗原決定簇稱作隱位。

在聚合物和單體表面都可以利用的抗原決定簇稱作metatopes。將相同或不相同的單體組裝到高分子上可得到不同的抗原決定簇的表面。這些抗原決定簇可以由不同單體的氨基酸殘基構成，也可能是單體的構型變化引起的，例如：變構轉變。這種抗原決定簇稱作neotopes。

例如，病毒傳染的免疫失活源于抗體與病毒顆粒表面的抗原結合。因此，metatopes/neotopes在免疫的人或動物體內產生抗病毒抗體扮演者至關重要的腳色。雖然neotopes絕對重要，或者他們扮演重要的顯性免疫角色，但有時形成的抗體由于單體的免疫完全不能壓制病毒，或者，也許活性太低(依據病毒感染的中立化測量)。鑒于以上情況，需要指出的是，neotopes不但起因于單體的完全組裝(病毒結構部分)成最終聚合物(病毒的外殼或包膜)，而且也源于幾個相同或不同的單體有限的結合。

顯性抗原免疫決定簇也許不一定位于代表蛋白質的主要結構的氨基酸序列鄰近位置，但是通過蛋白質鏈的適當折疊，殘基也許會將其帶入此鄰近位置。這種折疊可用半胱氨酸殘基的雙硫鍵固定住。在此類事例中，抗原決定簇可通過合成多肽模擬出來，由氨基酸殘基構成的這些多肽不是直接連接到蛋白質序列上。C.L.Lee和M.Z.Atassi，說過“溶菌酶第三個抗原點的描繪，是通過一種新穎的‘表面模擬’的合成方法的應用直接連接到構象相近的殘基形成的位點”(Biochem.J.，159，89-93，1976)。

合成的抗原用來測定癌癥病人血清中癌胚抗原的水平，R.Arnon等人的文獻：“利用合成多肽進行免疫測定：測試等效與胚胎抗原的放射性免疫測定””(Isr.J.Med.Sci.，13，1022-1027，1977)。

關于制備的單克隆抗體與天然抗體，G.Galfre和C.Milstein做了相關報道(Methods?in?Enzymology，Vol?73，″Immunochemical?Techniques，Part?B；Preparation?of?Monoclonal?Antibodies：Strategies?and?Procedures″，1-45，Academic?Press，New?York，1981.)